جرت بعون الله تعالى مناقشة رسالة الماجستير للطالبة ذاريات عبدالرحمن مطلك الجبوري من قسم علوم الحياة والموسومة :
التحري عن بعض جينات عوامل الضراوة لبكتريا Enterobacter sakazakii المعزولة من عينات بيية وسريرية
وذلك في يوم الثلاثاء الموافق17/ 1 / 2017 وعلى قاعة المرحوم الاستاذ سالم عبد الحميد
وتألفت لجنة المناقشة من التدريسيين الأفاضل :
ا. د جيهان عبدالستار سلمان رئيسا
ا. م.د الهام سعيد عبدالكريم عضوا
ا.م. د صدام حسين جبر عضوا
ا. م.د لمى عبدالهادي زوين عضوا ومشرفا
الخلاصة :
اجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص بكتريا Cronobacter sakazakii من حليب الأطفال المجفف ومن الحالاتِ السريرية لأطفالٍ دون عمر السنتين . إذ جمعت230) ) عينة، شملت (30) عينة حليبَ أطفال لأعمـــار مختلفة دون عمــــــــــر السنتين شمـــــــــلت Dialak1,2,3), MAMILAC1,2, Novolac AD, Novolac AR, Novolac Allernova , Similac1, Nictalia1,2, Celia1,2 , Nursoy 1 , Alpha1, Similac Gain Total Comfort , Sunny baby1, DABDUB 1, S-26AR, Primalac 1 premium ,S-26 LF, S-26 PDFgold, Primalac 1,2 , Biomil plus, Dovelac1,2 Liptomil plus1,2 , Guigoz 1) من مناطق مختلفة من بغداد، و(200) عينة سريرية، تضمنت 50 عينة من كل من (سائل النخاع الشوكي ودم وخروج والبول)، من مستشــــــــفى مدينة الطب (حماية الأطفال ) ومستشفى الطفل المركزي, للمدة من الأول من أيلول 2015إلـــــى الأول من كانون الثاني 2016م.
زرعت العينات على أوساطٍ زرعية خاصة، إذ زرعــــــــــت عينات الحليب على وسط Enterobacter enrichment broth(EEB) وبعـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــدها زرعت علــــــــــــــــــــــى وسط Violet red bile glucose Agar فأعطت المستعمرات لونَ وردي بنفسجي، وزرعـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــت العينات السريـــــــــــــــــــــــــــــــــــــرية (سائل النخاع الشوكي والدم) علــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــى وسط Brain heart infusion broth بعدها زرعت على وسط MacConkey agar ، أما عينات (الخروج والبول) فزرعت مباشرة على وسط MacConkey agar ، فأعطت المستعمرات لون ورديَ، التقطت المستعمرات النامية على وسط VRBGAووسط MacConkey agar وزرعت على وسط Tryptone soy agar فأعطت المستعمرات لون اصفر ذهبي ، ثم زرعت على وسط Biriiltent Enterobacter sakazakii agarفأعطت المستعمرات لونَ أخضر.
وشخصت العزلات بالفحوصاتِ المجهرية والمزرعية و الكيموحيوية، فأعطت احتماليةَ 99% في جهــــاز Vitek-2 إذ أمكنَ الحصول على 19 عزلة، وكانت جميعها تعود لبكتيريا Cronobacter sakazakii، وتضمنت 6 عزلات من عينات الحليب و بنسبة تلوث 9.09 % موزعة بواقع 3 عزلات من عينات حليــــبِ Dialak1 وعزلة واحدة من عينات حليب Novolac Allernova و 2 عزلـــــة من عينات حليب Novolac AD .اما العينات السريرية فقط تم الحصول على 89 عزلة شخصت 13 عزلة على انها C.sakazakii و بنسبة تلوث 6.5 % موزعة بواقع 6 عزلات من عينات سائل النخاع الشوكي بنسبة تلوث 12%، و7 عزلات من عيناتِ الدمِ بنسبة تلوث 14% ، ولم يتم الحصول على البكتريا من عيناتِ الخروج والبول. اما 76عزلة المتبقية كانت عائدة لبكتريا اخرى شخصت باستعمال نظام API-20E.
بينت نتائج التحري عن بعض عوامل الضراوةِ مظهريا بان جميعَ العزلات البكتيرية كانت قادرةً على إحداثِ حركة Swimming بقطر يتراوح بين ( 9 – 1ملم ) و Swariming بقطر يتراوح بين 40-1)ملم) , وقدرتَها أيضًا على تكوينِ الغشاء الحيوي Biofilm باستخدامِ 3 طرائــــــــــق، إذ بينت النتائـــج قدرةَ جميعِ العزلات علـــــــى تكويــــــــنِ الغشاء الحيوي بطريقــــــــــــــة Congo red media إذ ان 16 عُزلة من أصل 19 عزلة بنسبةِ 84.21% قادرة على تكوين الغشاء الحيوي على وسط أحمر الكونغو الصَّلب منها 4 عزلات بكتيرية بنسبةِ 21.05% كانت منتجة للغشاءِ الحيوي وبشكل قوي، أي اعطت مستعمرات شديدة السواد ، و 10 عزلات بكتيرية بنسبةِ 52.63% كانت منتجة للغشاءِ الحيويّ وبشكل متوسط، أي أعطت مستعمرات ذاتَ سواد متوسط ، وعزلتينِ بكتيريتينِ بنسبة 10.52% كانت منتجة للغشاءِ الحيوي بشكل ضعيف، أي أعطت مستعمرات ذات سواد قليل جدًّا ، في حين كانت 3 عزلات بكتيرية بنسبةِ 15.79% غيرَ قادرة على تكوينِ الغِشاءِ الحيوي، أي اعطت مستعمرات وردية اللون , أما بطريقة Tubes method فقد وجد انَ 4 عزلات بكتيرية بنسبةِ %21.05 كانت منتجة للغشاءِ الحيوي بشكل قوي، و13 عزلة بكتيرية بنسبةِ 68.42 % كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل متوسط ، وعزلتين بكتيرية بنسبة 10.53 % كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف. و بطريقة Microtiter method وجد إن 9 عزلات بكتيرية بنسبةِ %47.37 كانت منتجة للغشاءِ الحيوي بشكل قوي؛ و 8 عُزلات بكتيرية بنسبةِ 42.11 % كانت منتجة للغشاءِ الحيـــــــــوي بشكل متوسط؛ ، وعزلتين بكتيرية بنسبة %10.53 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف .
وأظهرت نتائج فحصِ الحساسيةِ باستعمال جهاز Vitek-2 كونه أكثر كفاءة مقارنة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضاداً حيوياً لتحديد التركيز المثبط الادنى MICs, وبينت النتائِج ان جميعَ العزلات البكتيريةِ كانت حساسة Sensitive بنسبة 100% لعددٍ من المضَاداتِ الحيويةِ المستعملةِ في الــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــدراسة وهـــــــــــي Ampicillin –Sulbactam و Cefotaxim و Cefpodoxime و Ceftazidime و Ciprofloxacim و Gentamicin وImipenumو Levofloxacin و Meropenem و Tazobactam– Piperacillin وTrimethoprim – Sulfamethoxaole و Tigecyclin. بينما اختلفت العزلات البكتيرية فكانت مقاومة Resistance أو متوسطة Intermediate , إذ كانت نسبة المقاومة اتجاه المضاد الحيوي Cefuroxim و Cefuroxim Axetil بنسبة 5.26 % على التوالي, في حين كانت متوسطة الحساسية اتجاه المضاد الحيوي Ampicillin بنسبة %5.26 و للمضاد Cefuroxim بنسبة %15.79, وللمضاد Cefuroxim Axetilبنسبة 52.63% وللمضاد Nitrofurontion بنسبة %15.79 .
تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياC.sakazakii وتضمنَت هذهِ الجيناتُ كلاً من ompA و zpx و fliD وأظهرت النتائج وجودَ هذهِ الجيناتِ بنسبةِ 100% في جميع العزلات.
شخصت 76 عزلة المتبقية والمعزولة من العينات السريرية اذا شملت (Escherichia coli بنسبة %25 و و Proteus vuglaris و Proteus penneri و بنسبة 2.63% على التوالي, و Proteus mirabilis بنسبةِ 10.53% ، و Enterobacter clocae بنسبة 11.84% ، و Enterobacter aerogenes بنسبة 5.26% و Salmonella arizonae و Raoultella ornithinolytica بنسبةِ 7.89% على التوالي ،و Klebsiella pneumonia بنسبة %15.79 و Serratia marcescen و Serratia odoriferaو Stenotrophomonas maltophilia بنسبة 1.32% على التوالي، و Citrobacter koseri بنسبة 2.63% و Shewanella putrefaciens بنسبةِ 3.94% .
وحضر المناقشة جمع من التدريسيين وطلبة الدراسات العليا وذوي الطالبة والضيوف الكرام .تمنياتنا للطالبة بدوام الموفقية والنجاح.