قسم علوم الحياة يناقش رسالة ماجستير تتحرى أجناس بكتيرية تسبب التهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع

ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة (دراسة بكتريولوجية لمرضى التهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع) للطالب (عبد الكريم عناد حمود) التي انجزها باشراف التدريسية (أ.م.د. لمى عبد الهادي زوين).

 

وتهدف هذه الدراسة الى التحري عن أجناس بكتيرية تسبب التهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع أو علاقتها بالمرضى فضلاً عن عدم وجود الدراسات البكتيريولوجية المحلية عن التهاب الأمعاء التنخري، ولتحقيق هذه الأهداف تم اتباع الخطوات الآتية:

1. الحصول على عينات (خروج، دم، بول) من أطفال رضع أو حديثي الولادة.

2. عزل وتشخيص البكتريا بالطرائق المزرعية والكيموحيوية واستعمال جهاز الفايتك.

3. دراسة بعض عوامل الضراوة للبكتريا المعزولة لاسيما السائدة.

4. دراسة حساسيتها للمضادات الحيوية باستعمال التركيز المثبط الأدنىMIC) ) بجهاز الفايتك.

5. الكشف عن الجينات التي تشفر إلى عوامل الالتصاق (fimA fimH, mrkA, mrkD,).

 

أجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص الأجناس البكتيرية المسببة لالتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع، إذ جمعت (64) عينة سريرية من مستشفى حماية الأطفال بمدينة الطب ببغداد لأطفال مصابين بالتهاب الأمعاء التنخري تضمنت (41) عينة من الخروج Stool  و(14) عينة من الدم Blood و9 عينات من البولUrine  للمدة من 29/1/2018 إلى 4/4/2018. زرعت جميع العينات على وسط أكار الماكونكيMacConkey agar  ووسط أكار الدم Blood agar.

شخصت العزلات بالفحوصات المجهرية والمزرعية والكيموحيوية، فضلاً عن التشخيص باستعمال جهاز Vitek-2 إذ أمكن الحصول على (43) عزلة، ومن خلال التشخيص بنظام الفايتك تبين إن (26) 60.46%عزلة تعود لبكتريا Klebsiella pneumoniae و (8) 18.60% عزلات Escherichia coli و(4) 9.30% عزلاتPseudomonas aeruginosa  وعزلتين Klebsiella oxytoca  4.65% وعزلتينEnterobacter cloacae  بنسبة 4.65% وعزلة واحدة لبكتريا  Proteus hauseri بنسبة 2.32%.

أظهرت النتائج ان بكتريا K. pneumoniae هي النوع السائد في العينات المأخوذة من الأطفال الرضع المصابين بالتهاب الأمعاء التنخري، وكانت  23(88.46%) عزلة بكتيرية المعزولة من عينات الخروج  وعزلتين (7.69%) من الدم وعزلة واحدة 3.84% من البول.

أظهرت نتائج فحص الحساسية باستعمال جهاز Vitek-2  كونه أكثر كفاءة مقارنة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضاداً حيوياً لتحديد التركيز المثبط الأدنى Minimum Inhibitory Concentration (MICs)، وبينت النتائج أن جميع العزلات البكتيرية كانت مقاومة Resistance بنسبة 100% لمضادي Amoxicillin  وAmpicillin ، فيما أظهرت العزلات البكتيرية مقاومة بنسبة 96.15% لمضاد Piperacillin، ومقاومتها اتجاه المضادات الحيوية Cefazolin وCeftazidime وCeftriaxone و CefepimeوTrimethoprim/ Sulfamethoxazole بنسبة 88.46% ومقاومة للمضاد Ampicillin/sulbactam بنسبة 73% والمضادCefoxitin  بنسبة 61.54% ومقاومة للمضاد Meropenem والمضاد Tobramycin  بنسبة 57.70%، وكذلك مقاومة للمضاد Amikacin والمضاد Gentamicin بنسبة 50%، ومقاومة للمضاد Ertapenem والمضاد Ciprofloxacin بنسبة 38.46%، ومقاومة للمضاد Levofloxacin بنسبة 23.07 % ومقاومة للمضاد Nitrofurantoin بنسبة 15.38%، بينما كانت العزلات البكتيرية متوسطة المقاومة للمضاد Ampicillin/Sulbactam والمضاد  Levofloxacinبنسبة 19.23%، وللمضاد  Meropenemبنسبة 3.84% وللمضاد Ciprofloxacin بنسبة 7.69% وللمضاد Nitrofurantoin بنسبة 53.84%.

بينت نتائج التحري عن بعض عوامل الضراوة مظهرياً بأن جميع عزلات بكتريا K.pneumoniae كانت قادرة على الالتصاق بوساطة الخمل من النوع الأول T1f بنسبة 61.54% والخمل من النوع الثالث T3f بنسبة 38.46%، واختبرت قدرة البكتريا على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm باستعمال طريقة الكونغو الأحمر, إذ بينت النتائج قدرة أغلب العزلات البكتيرية على تكوين الغشاء الحيوي ، إذ أن 14 عزلة بنسبة 53.84% كانت مكونة للغشاء الحيوي وبشكل قوي و10 عزلات بنسبة 38.46 % كانت مكونة للغشاء الحيوي وبشكل متوسط ، في حين كانت عزلتان بنسبة 7.7 % غير مكونة للغشاء الحيوي.

تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياK.pneumoniae  وتضمنت هذه الجينات كلاً من fim A و fim H التي تشفر عن بروتين التصاق الخمل العائدة إلى النوع الأول وجينات mrk A وmrk D التي تشفر عن بروتين التصاق الخمل العائدة إلى النوع الثالث، وأظهرت النتائج وجود جينات fim A و fim H و mrk A بنسبة 100% في جميع العزلات، أما جين  mrk D فلم يظهر في جميع العزلات.

وبناء على ما سبق فقد استنتج الطالب مايلي :

1. اظهرت بكترياpneumoniae هي النوع السائد في العينات المأخوذة من الأطفال الرضع المصابين بالتهاب الأمعاء التنخري وكانت تحتل أعلى نسبة أصابة وجاءت بعدها بكتريا E.coli و P. aeruginosaو K.oxytoca و E.cloacae وبكتريا P.hauseri بأقل نسبة إصابة.

2. يمكن الاعتماد على عينات الخروج في تحديد نوع الإصابة البكتيرية في الاطفال المصابين بالتهاب الامعاء التنخري.

3. أظهرت عزلات بكتريا pneumoniae مقاومتها بنسبة عالية للعديد من المضادات الحيوية المستعملة في الدراسة عند تحديد التركيز المثبط الأدنى (MICs) باستعمال جهاز الفايتك.

4. وأظهرت عزلات بكتريا pneumoniae أنماط مقاومة عالية للمضادات الحيوية.

5. أظهرت بعض عزلات بكتريا pneumoniae امتلاكها معاً الخمل من النوع الأول والثالث وأظهرت قدرتها على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm باستعمال طريقة الكونغو الأحمر.

6. تختلف العزلات في امتلاكها لجينات الالتصاق بالاعتماد على مصدر العزلة إذ أظهرت نتائج الكشف عن جينات الضراوة امتلاك بكتريا pneumoniae كل من الجينات fim A و fim H و mrk A في جميع العزلات وبنسبة 100%، أما جين mrk D فلم يظهر في جميع العزلات.

التوصيات Recommendation

1. إجراء دراسات للكشف الجيني عن الخمل من KPC وKPF-28 في الأنواع البكتيرية المسببة لإلتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع.

2. اعتماد طرائق حديثة أخرى للكشف المظهري عن الخمل من النوع الأول والثالث للبكتريا المسببة لإلتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع باستعمال تقنية جهاز Fluorescent.

3. إجراء دراسات للتحري عن قابلية التصاق البكتريا المسببة لإلتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع على الأنسجة الطلائية والأجهزة الطبية.

4. ضرورة العمل على الخلط بين المضادات للحد من المقاومة المتعددة للبكتريا المسببة لإلتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع.

5. دراسة التعبير الجيني للخمل من النوع الأول والثالث.

6. جب أن تكون هناك طرائق حديثة للتحري عن البكتريا المسببة لإلتهاب الأمعاء التنخري عند الأطفال الرضع باستعمال التشخيص المصلي و PCR.

   Department of Biology discusses M.Sc. Thesis on Bacteriological Study of Necrotizing Enterocolitis Patients in Infants

   Department of Biology  was discussed M.Sc. Thesis on  Bacteriological Study of Necrotizing Enterocolitis Patients of Abdulkareem Enad  supervised by Asst.prof.Dr.Luma Abdulhadi Zowain

    Summary

   This study was conducted to isolate and identification of bacterial from infants genera with Necrotizing Enterocolitis.

   Sixty four clinical samples were collected from the children protection hospital of the Medical city in Baghdad for infants infected of Necrotizing Enterocolitis where included (41) samples from stool and (14) samples from Blood and (9) samples from urine for the period from January 2018 to April 2018.

   All samples were cultured on Mac Conkey and Blood agar. All isolates were identification depending on macroscopic  microscopic, and biochemical test as well as definite with Vitek-2 compact system, (43) isolates were obtained from patiants (26) isolates belonged to K.pneumoniae (60.46%), 8 isolates toE.coli (18.60%), 4 isolates diagnosed as P.aeruginosa (9.30 %), 2 isolates toK.oxytoca (4.65%), 2 isolates toE.cloacae (4.65%) and one isolate to P.hauseri (2.32%).

   The results showed that K.pneumoniae was the predominant 26 (88.46 %) isolates from stool, 2(7.69%) from blood and 1(3.84%) isolate from urine.

   The results of the investigation of some virulence factors revealed that all K. pneumonia isolates were able to attachment by the fimbriae of type 1 (T1f) 61.54% and type 3 (T3f) 38.46% and were ableto form bio, film to using Congo red agar method.

   The results showed ability most of K.pneumoniae isolates to form bio film on Congo red agar media where it 16(53.84%) isolates of 26 isolates which belong to K.pneumoniae were able to form bio film strongly and 10(38.46%) isolates were able to form bio film moderately while 2(7.7%) isolates were unable to form bio film.

   Results of the sensitivity test shown by using Vitek-2 compact system was its more efficient than the traditional methods towards 18 antibiotics to determine the Minimum inhibitory concentration (MICs).

   The results showed that all K.pneumoniae isolates were resistant 100% to Ampicillin and Amoxicillin, while were resistance 96.15% to Piperacillin, 88.46% of isolates were resistant to Cefazolin, Ceftazidime, Ceftriaxone, Cefepime and Trimethoprim/Sulfamethoxazole, 73% to Ampicillin/Sulbactam, 61.54% to Cefoxitin, 57.70% to Meropenem and Tobramycin, 50% to Amikacin and Gentamicin, 38.46% to Ertapenem and Ciprofloxacin, 23.07% to Levofloxacin, 15.38% to Nitrofurantoin, whereas the bacterial isolates were moderately resistant to Ampicillin / Sulbactam and Levofloxacin to reched 19.23% and to Meropenem 3.84% and to Ciprofloxacin 7.69% and to Nitrofurantoin 53.84%.

   In this study investigated of some of the virulence genes to K.pneumoniaebacteria, these genes included both fim A and fim H which encodes for the fimbriae adhesion protein which belong to type 1, genes mrk A and mrkD which encodes for fimbriae adhesion which belong to type 3 and the results showed presence of genes fimA, fimH and mrkA 100% in all isolates while mrkD gene were not detected in all isolates.

   ---