رسالة ماجستير تدرس تأثير مستخلص نبات الفلفل الحار Capsicum annum L على بكتريا Enterobacter cloacae و عوامل ضراوتها

ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) بجامعة بغداد رسالة الماجستير الموسومة ” دراسة جزيئية لبعض عوامل ضراوة بكتريا Enterobacter cloacae  و تأثير مستخلص نبات الفلفل الحارCapsicum annum L عليها ” في تخصص (الاحياء المجهرية ) للطالبة (طيبة أياد أحمد سيزائي) و التي انجزت باشراف التدريسية في القسم (أ.م.د. سعاد خليل أبراهيم).

 وتهدف الرسالة الى :

1 – عزل بكتريا E.cloacae من مصادر سريرية مختلفة وتشخيصها بأستعمال الاختبارات الكيموحيوية و جهاز الفايتك بالاضافة الى تشخيصها جزيئياً بأستعمال جين hsp60 .

2 – الكشف المظهري عن عوامل ضراوة  بكتريا E.cloacae : الانزيم الحال للدم ، و أنزيم البروتيز ، و تكوين الغشاء الحيوي ، و تكوين المحفظة ، و أنتاج البكتريوسين .

3- الكشف عن جينات الالتصاق الهدبي  لبكتريا E.cloacae بأستعمال تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR.

4 – أجراء فحص الحساسية للمضادات الحياتية المختلفة .

5 – دراسة تأثير المستخلص الكحولي للفلفل الحار على نمو البكتريا .

 ,تضمنت الدراسة  جمع مائة وخمسون عينة من مصادر سريرية مختلفة  شملت 50 ) ) عينة من البول و  (50) عينة من مسحات الحروق و (20) عينة من مسحات الجروح و ((15 عينة من الدم و (15) عينة من القشع  من عدة مستشفيات مدينة بغداد .

و زرعت العينات على وسط آكار الماكونكي للتمييز بين البكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز وغير مخمرة و زرعت أيضاً على وسط آكار الأيوسين المثيل الازرق و أجريت الاختبارات الكيموحيوية للتشخيص الاولي للبكتريا ثم أُجري تأكيد تشخيصها بأستعمال جهاز فايتك Vitek compact 2 إذ تم الحصول على( 13 ) عزلة بكتيرية تعود للنوع Enterobcater  cloacae و أستعمل أيضاً الجين الخاص بتشخيص هذا النوع البكتيري hsp60 إذ امتلكت (13) عزلة بكتيرية هذا الجين وبحجم تضاعفي 341 زوج قاعدة .

درست بعض عوامل ضراوة هذه البكتريا إذ وجد ان جميع العزلات البكتيرية مكونة للمحفظة 100) %) و كما ان عزلة واحدة ((%7.6 أنتجت البكتريوسين . كما أظهرت الدراسة عدم قدرة العزلات البكتيرية على أنتاج الانزيم الحال للدم ، والى عدم قدرتها على أنتاج أنزيم البروتيز.

شملت الدراسة الكشف عن قابلية بكتريا E .cloacae على أنتاج الغشاء الحيوي بأستعمال طريقة صفيحة المعايرة الثلاثية إذ كانت جميع العزلات مكونة للغشاء الحيوي (100%) و ان 30) %) من العزلات كونت الغشاء الحيوي بشكل قوي و (70 %) من العزلات كونته بشكل متوسط .

أختبرت مقاومة العزلات البكتيرية قيد الدراسة أتجاه (6) من المضادات الحيوية و بأستعمال طريقة أنتشار الاقراص إذ بينت النتائج ان العزلات البكتيرية كانت مقاومة للمضاد Ceftriaxone  بنسبة (85 % ) ولمضاد Cefotaxime  بنسبة ( ( %61.5 في حين أبدت هذه العزلات مقاومة أقل للمضاد  Gentamycinبنسبة 54)%) و للمضاد Ciprofloxacin بنسبة (23%)  وللمضاد Amikacin  بنسبة (15%) في حين كانت جميع العزلات حساسة للمضاد Imipenem .

أستعمل المستخلص الكحولي لنبات الفلفل الحار لدراسة تأثيره التثبيطي على البكتريا بأستعمال طريقة الانتشار بالحفر لجودتها ، وسهولة أجرائها ، و وضوح نتائجها، و عند التراكيز (25 ,50  ، 75 , 100 ) ملغم/مل.  بينت النتائج أختلاف درجة تثبيط المستخلص بأختلاف التركيز ، إذ أزدادت شدة التثبيط بزيادة تركيز المستخلص و ذلك بسبب زيادة تركيز المواد المثبطة فيه .

أُجري الكشف على جينات الضراوة بأستعمال المعلمات الوراثية المرتبطة بقدرة البكتريا على أحداث الخمج والمعروفة بجينات الالتصاق الهدبي Curli fimbriae إذ كانت نتائج تفاعل البلمرة المتسلسل PCR امتلاك جميع العزلات البكتيرية للجين csgA بنسبة (%100) وبحجم 245 زوج قاعدة بينما أظهرت نتائج الكشف عن جين ( csgBA(C وجود هذا الجين في 10 عزلات بكتيرية بنسبة (76.9%) وبحجم 1300 زوج قاعدة .

و اوصت الدراسة بالتوصيات التالية :

1 – أجراء دراسات لجينات ضراوة أخرى والتي تمتلكها بكتريا E.cloacae .

2 –  الاعتماد على جين hsp60 في تشخيص بكتريا E.cloacae .

3 – أجراء دراسات عن مقاومة البكتريا للمضادات الحيوية و تحديد الجينات المسوؤلة عن هذه المقاومة .

4 – أجراء عملية أستخلاص للمركبات الفعالة في الفلفل الحار و تنقيتها بوساطة HPLC و دراسة تأثيرها على البكتريا .

5 – أجراء دراسات موسعة عن تحليل التسلسل التتابعي للحامض الاميني  لتحديد نوع وعدد التغايرات الوراثية و تأثير  هذه التغايرات في ترجمة البروتين أضافة الى تأثيرها على عوامل الضراوة .

وحصلت الطالبة على تقدير الامتياز بعد مناقشتها من قبل لجنة المناقشة التي تألفت من الذوات المدرجة اسمائهم فيما يلي:

• أ.د. رنا مجاهد عبد الله             (رئيسا)

• أ.م.د. حيدر كاظم يعقوب          (عضوا)

• أ.م.د. عذراء حميد حسون        (عضوا)

• أ.م.د. سعاد خليل ابراهيم        (عضوا)

 

---

MSC .Thesis deals with the impact of capsicum annum on Enterobacter cloacae extract and its damage factors

 The department of Biology in college of education for pure science (Ibn Al-Haitham) in University of Baghdad discussed MSc .thesis of student (Teba Ayad Ahmed Cezai)entitled 

Molecular study of some virulence factors of Enterobactercloacae  and the effect of Capsicum annum on it)supervised by Asst.prof.Dr.Sua’ad Khalil Ibrahim

The discussion committee

Prof.Dr.Rana Mujahid Abdulla    Head

Asst.prof.Dr. Haidar Kadum Ya’aquoob    member

Assr.prof.Dr.Athra’a Hameed Hasson   member

Asst.prof.Dr.Suaad Khaliln Ibrahim    member

The Abstract

One hundred fifty were collected from different clinical sources included fifty samples from urine, fifty samples from burn s swabs, twenty samples from wound swabs, fifteen samples from blood and ten samples from sputum from several hospitals in Baghdad city.

The samples were culturing on MacConkey agar to differentiation between the lactose and non lactose fermented, Eosin methylene blue agar then biochemical tests done for primary diagnosis and then identified by Vitek 2 compact, it was obtained thirteen isolate related to Enterobacter cloacae , and also use the sequencing of  hsp60 gene to identity isolates of  E.cloacae  and its show in thirteen isolates with alignment of (341) pb.

Some of virulence factors of this  bacteria were studied in this study and revealed that all of bacterial isolates were capsule forming (100%), and only one isolate produced bacteriocin (7.6%). The results investigated the disability of isolates to produce the enzymes hemolysin and protease.

This study included also the phenotypic detection of biofilm forming isolates, biofilm test was done by microtiter plates technique and results revealed that all of isolates were positive for biofilm (100%), (30%) of them were strongly forming bio film and (70%) of them were moderately forming bio film.

The results of susceptibility test against (6) antibiotics which was done by disc diffusion method showed that (85%) of isolates were resistant to Ceftriaxone, (61.5%) of isolates were resistant to Cefotaxime,(54%) of isolates were resistant to Gentamycin,  (23%) of isolates were resistant to Ciprofloxacin, (15%) of isolates were resistant to Amikacin while all isolates were sensitive to Imipenem.

The inhibitory effect of alcoholic extract of Capsicum annum was studied on Enterobactercloaceausing wells diffusion method for its accuracy in work and results, at the concentrations of (25,50,75,100) mg/ml, the results showed different inhibitory levels by different concentrations. Thus, the intensity of inhibition increased by increasing concentration of extract.

 The molecular detection of virulence factors was done using specific primers that associated with the ability of bacteria to cause the infection and known as Curli fimbriae, the results of PCR showed that all of isolates were positive for the gene csgA (100%) with product size of 245bp while only 10 isolates (76.9%) were positive for the gene csgBA(C) with product size of 1300bp.