ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة (الطبعة الوراثية والتنوع الوراثي في جينين لدى مرضى سرطان الرئة ) للطالبة ( ميس عدنان حيدر ) التي انجزتها تحت اشراف التدريسي في القسم (أ.م.د. محمد مهدي جواد ).
وهدفت هذه الدراسة الى تقييم تأثير تعدد الاشكال في الجين XPD في قابلية الإصابة بسرطان الرئة. والتحقق من ارتباط اثنين من الأشكال في الجين FOXP3 (T/2383 C – ) و المنطقة الانترونية IVS9 التي تحتوي على الطفرة +459 T/C ذات التنوع الوراثي , مع سرطان الرئة وبطريقتي الطبعة الوراثية Genotyping والتسلسل التتابعي Sequencing على التوالي .
وبينت الطالبة ان سرطان الرئة هو مرض متعدد الأسباب (عوامل خارجية وداخلية), قد تؤثر متغيرات مختلفة في جينات اصلاح الحامض النووي DNAمما تتسبب في تلف الحامض النووي. يشفر جينXPD أحد جينات الاصلاح المهمة ويعتقد ان تعدد الاشكال في هذا الجين له أهمية كبيرة في خطر الاصابة بسرطان الرئة, إذ أكدت الدراسات ان الافراد الذين لديهم تعدد الأشكال Lys751Gln من جينXPD لديهم قدرة اصلاح منخفضة لأضرار الحامض النووي. يعد تثبيط CD4+CD25+regulatory Tcell أحد الاليات الاساسية التي تستعملها الخلايا السرطانية للتهرب من الجهاز المناعي وللجين FOXP3 دور في تثبيط الخلايا التائية التنظيمية ووظيفتها.
هدف هذه الدراسة هو تقييم تأثير تعدد الاشكال في الجين XPD في قابلية الإصابة بسرطان الرئة. والتحقق من ارتباط اثنين من الأشكال في الجين FOXP3 (T/2383 C – و IVS9+459 T/C مع سرطان الرئة.
جمعت 68عينة دم من مرضى سرطان الرئة, منها 63عينة دم لمرضى سرطان الرئة من النوعين الرئيسين (غير صغير الخليةNon small cell و صغير الخلية Small cell), منهم 53 مدخناً و15غير مدخن و54 من الذكور و9 من الاناث وتراوحت أعمارهم بين 31الى80 عاما, فضلا عن 24 عينة دم من أفراد سليمين.
تم استخلاص الحامض النووي DNA, واستعمل الجهاز الخاص بتقانة PCR لتضخيم الجينات XPD و FOXP3 وأظهرت الدراسة ان حجم قطعة الجين XPD كان 476 زوجاً قاعدياً وحجم قطعة الجين FOXP3 (T/2383 C –) كان 388 زوجاً قاعدياً,أما قطعة الجين FOXP3 IVS9+459 T/C)) فكانت بحجم 373 زوجاً قاعدياً.
اعتمدت طريقة PCR-RFLP لقطع قطعة الدنا المضخمة بتقانة PCR, لتحديد التراكيب الوراثية وتكرارات الاليلات, إذ استعمل الانزيم PstI لقطع قطعة الجين XPD والانزيم BsrI لقطع قطعة الجين FOXP3 (T/2383 C).
كشفت الدراسة الجزيئية لجين XPDعن ثلاثة تراكيب وراثية (AA,AC,CC) وأظهرت النتائج ان التركيب الوراثي AC سجل تكراراً عالياً في مجموعة المرضى بالمقارنة مع مجموعة السيطرة مع وجود فرق معنوي عالٍ (P>0.01) و التركيب الوراثي AA سجل نسبة أعلى في مجموعة السيطرة منه في مجموعة المرضى مع وجود فرق معنوي عالٍ (P>0.01) أما التركيب الوراثي CC فلم يلاحظ في السيطرة.
أما الجين (T/2383 C) FOXP3فقد اظهر التركيب الوراثي CC نسبة أعلى في المرضى مما في السيطرة مع وجود فرق معنوي عالٍ (P>0.01) والتركيب الوراثي CT فكانت نسبته في السيطرة أعلى مما في المرضى وبوجود فرق معنوي عالٍ(P>0.01), أما التركيب الوراثي TT فلوحظ غيابه التام في عينات السيطرة.
أًجري تحليل التسلسل التتابعي DNA sequencing للقواعد النتروجينية لقطعة الجين FOXP3 التي يبلغ حجمها 373 زوجاً قاعدياً وهي جزء من الانترون 9 للجين وتسمى IVS9 إذ استعملت البوادئ الأمامية Forward وتبين وجود مكان التنوع الوراثي ويقع بين التسلسل ACCGT في بعض التسلسلات المدروسة وACCAT في تسلسلات اخرى.
واوصت الطالبة في ختام رسالتها بالتوصيات التالية :
-
اتاحة وقت أكثر لمثل هذه الدراسات لأنها تحتاج لجمع عينات كبيرة لكل فئة من فئات المرض أو نوع منه.
-
فتح افاق التعاون بين المؤسسات الصحية والجامعات وزيادة عدد المستشفيات الجامعية لتسهيل جمع العينات .
-
مقارنة عينات أقارب المرضى والأصحاء لتوقع حدوث المرض.
-
دراسة واسمات وطرائق تحليل وراثية أُخرى مثل RTqPCR.
-
دراسة جينات أُخرى من المتوقع أن يكون لها علاقة بالمرض أو ليس لها علاقة وهي نتيجة علمية ليتجنب الباحثين دراستها مستقبلاً.
-
ربط الدراسة الوراثية بدراسات مناعية أُخرى.
Genotyping and genetic polymorphism in two genes in lung carcinoma patients
By Maiss Adnan Haidar Al-Ward
Supervised by by Asst .prof.Dr.Mohammed Mahdi Jawad
Abstract
Lung cancer is a multi-cause disease (external and internal factors). Different variables may affect DNA repair genes and thus cause DNA damage. Gene XPD encodes one of the important genes of repair and believes that multiple forms in this gene are of great importance in the risk of lung cancer. Studies have shown that individuals with Lys751Gln polymorphisms of the XPD gene have a low repair capacity for DNA damage. CD4 + CD25 + regulatory Tcellis one of the basic mechanisms used by cancer cells to evade the immune system and FOXP3 has a role in inhibiting organizational T cells and function
The aim of this study is to assess the effect of polymorphism in the XPD gene on lung cancer susceptibility. Check the association of two forms in the FOXP3 gene (T / 2383-C and IVS9 + 459 T / C with lung cancer
The aim of this study is to assess the effect of polymorphism in the XPD gene on lung cancer susceptibility. Check the association of two forms in the FOXP3 gene (T / 2383-C and IVS9 + 459 T / C with lung cancer
DNA was extracted and the PCR device was used to amplify the XPD and FOXP3 gene. The study showed that the size of the XPD gene was 476 base pairs and the size of the FOXP3 gene (T / 2383 C) was 388 base pairs the FOXP3 IVS9 + 459
The PCR-RFLP method was used to cut the DNA fraction amplified by PCR technology to determine the gene structure and allele replication. PstI was used to cut the XPD gene and BsrI to cut the FOXP3 gene (T /C 2383
The genetic study of the gene of XPD revealed three genetic structures (AA, AC, CC). The results showed that the AC gene was recorded high frequency in the group of patients compared to the control group with a significant difference (P> 0.01) and the genotype AA recorded a higher percentage in the group (P> 0.01) and the CC gene was not observed in control
For the gene (T / 2383 C) FOXP3, CC showed a higher percentage of patients than control with a significant difference (P> 0.01) and the genetic structure of CT was higher in control than in patients with a significant difference (P> 0.01) , And the TT genotype was completely absent in control samples
Sequencing analysis was conducted DNA sequencing of the FOXP3 gene, which is 373 pairs in length, and is part of the genome atron 9, called IVS9. Forward Forwarders were used to determine the location of genetic diversity and are located between the ACCGT sequence in some studied sequences and ACCAT in other sequences
