ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة ( توصيف مستخلص عديد السكريد الشحمي المنقى من بكتريا pseudomonas aeruginosa وتأثير العوامل المختلفة عليه ) للطالبة ( سماح صالح لطيف جاسم ) التي انجزتها تحت اشراف التدريسية في القسم ( أ.م.د. سعاد خليل ابراهيم ).
ونوقشت الرسالة من قبل اعضاء لجنة المناقشة المدرجة اسمائهم فيما يلي :
أ.د. رنا مجاهد عبد الله رئيسا
أ.م.د. محمد فليح طريف عضوا
أ.م.د. محمد عباس فياض عضوا
أ.م.د. سعاد خليل ابراهيم عضوا و مشرفا
ويهدف البحث الى :
-
استخلاص عديد السكريد الشحمي من بكتريا pseudomonas aeruginosa
-
تنقية المستخلص جزئيا
-
تقدير الوزن الجزيئي والمحتوى الكربوهيدراتي والبروتيني للمستخلص
-
دراسة تأثير بعض العوامل على المستخلص
تم في هذه الدراسة جمع (100) عينة لحالات مرضية مختلفة للتحري عن بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ تم الحصول على (41) عزلة شخصت تشخيصاً اولياً بالفحوصات الكيموحيوية ثم شخصت بجهاز الفايتك Vitec – 2 compact) ) ثم اجري لها فحص الحساسية لستة انواع من المضادات الحيوية و اوضحت النتائج ان هذه البكتريا تمتلك حساسية عالية لكل من الكولستين والبوليمكسين وان المقاومة للمضادين هي اعلى من السنوات الماضية .
استخلص عديد السكريد الشحمي (Lipopolysaccharide) من العزلة رقم ( 27 ) بطريقة الفينول الساخن وتم الحصول على (LPS) الخام من الطور المائي ثم تمت تنقية المستخلص جزئيا بطريقة الترشيح الهلامي (Gel filteration) باستعمال هلام (Sephadex – G200) . ثم قدر تركيز الكربوهيدرت والبروتينات للمستخلص الخام والمنقى بالطرائق الكيميائية اذ كانت نسبة الكربوهيدرات والبروتينات في المستخلص الخام (%70.1) و(%29.8) على التوالي في حين كانت النسبة في المستخلص المنقى (%77.4) و(%21.5) للكربوهيدرات والبروتينات على التوالي علما انه لم يتم استعمال انزيمات (Dnase ,Rnase (Protase, في عمليتي الاستخلاص والتنقية . ثم قدر الوزن الجزيئي للمستخلص المنقى بطريقة الترشيح الهلامي باستعمال هلام (Sephacryl S-200) اذ بلغ الوزن الجزيئي (Molecular weight) للمستخلص المنقى (125.892) كيلو دالتون . تم الكشف عن عديد السكريد الشحمي وعن فعاليته البايلوجية باستعمال العدة (Limulus amebocyte lysate) اذ ادى معاملة (LPS) المنقى بالكاشف الى حدوث تجلط وهو مايدل على فعالية المستخلص البايلوجية . ثم تم التحري عن تأثير عامل الحرارة في المستخلص اذ تم معاملة المستخلص بالغليان باستعمال حمام مائي مغلي بدرجة (100) °م ضمن تركيز (200) مايكروغرام / مللتر ولمدة (15,10,5) دقيقة ثم كشف عنه باستعمال الكاشفLAL) ) اذ ابدى المستخلص مقاومة للمديات الحرارية المستعملة وضمن التركيز المحدد وادى الى التجلط عند معاملته بالكاشف . ثم تم التحري عن تأثير الحرارة الرطبة للمستخلص باستعمال المؤصدة بدرجة (121 (°م وضغط (15) باوند / انج2 وبتركيز (200) مايكروغرام / مللتر ولمدة (15,10,5) دقيقة ثم كشف عنه بأستعمال الكاشف (LAL) وتبين مقاومة المستخلص للحرارة الرطبة ضمن التركيز المحدد والمدد الزمنية المحددة . ثم تم دراسة تأثير المستخلص المنقى في خميرة Candida glabrata باستعمال طريقة Microdilution) ) اذ اظهرت النتائج ان المستخلص المنقى له تاثير تثبيطي في خميرة Candida glabrata وبنسبة 45%)) ثم تم استعمال المستخلص المعامل بالحرارة للتحري عن تاثيره على خميرة Candida glabrata وبالتراكيز والمدد الزمنية نفسها المستعملة مع الكاشف LAL)) وبينت النتائج ان الغليان والحرارة الرطبة لم تؤثر في الفعالية التثبيطية ل(LPS) المنقى على خميرة Candida glabrata وكانت النسب التثبيطية مقاربة لتأثير عديد السكريد الشحمي المنقى جزئيا غير المعامل .
واوصت الطالبة في ختام رسالتها بالتوصيات الاتية :
1 . اعتماد طرائق اخرى لتنقية عديد السكريد الشحمي مثل استعمال جهاز HPLC)) مع استخدام الانزيمات اثناء الاستخلاص .
2 . التحري عن الطرائق الفعالة لتكسير عديد السكريد الشحمي باستعمال الحرارة او المواد الكيميائية .
3 . اجراء تجارب للتحري عن تاثير عديد السكريد الشحمي في كائنات مجهرية اخرى .
4 . دراسة تأثير عديد السكريد الشحمي المنقى كلياً في الخمائر مع استعمال تراكيز مختلفة من عالق الخميرة وتراكيز مختلفة من عديد السكريد الشحمي .
Charactrization of purified lipopolysaccharide extract of pseudomonas aeruginosa and effect of different factors on it.
By Samah salih Latif
Supervised by Asst.prof.Sa’ad Khalil Ibrahim
Extract lipopolysaccharide of pseudomonas aeruginosa
Partially purified to extract
Estimate molecular weight and carbohydrate and protein for extract
Study effect of some factor on extract
Abstract
In this study, (100) samples were collected for different pathological cases to investigate Pseudomonas aeruginosa where (41) isolates were diagnosed with initial diagnosis by biochemical tests and then diagnosed with Vitec – 2 compact device.They were then given an allergy test for six types of antibiotics.
Lipopolysacharide was extracted from isolation (27) by hot phenol and the crude lipopolysaccharide was obtained from the aqueous phase. The extract was partially purified by gel filtration technique using (Sephadex – G200). The concentration of carbohydrates and proteins for crude extract and purified by chemical methods was estimated as (70.1%) and (29.8%) respectively for the crude extract, while the percentage in the purified extract was (77.4%) and (21.5%) for carbohydrates and proteins respectively. The enzymes (Dnase, Rnase and Protase) were not used in the extraction and purification processes. The molecular weight of the purified extract was estimated using gel-filtration technique using (Sephacryl S-200) gel. The lipopolysaccharide and its biologic activity were detected using the tool (Limulus amebocyte lysate).The treatment of purified LPS with the reagent resulted in a clot indicating the efficacy of the biologic extract. The effect of the heat factor on the extract was investigated, where the extract was treated by boiling using a boiling water bath at a temperature of (100) ° C within a concentration of (200) g/ml , period of time (5,10,15) minutes and then detected using the reagent (LAL) , where the extract showed resistance to thermal ranges used and within the specified concentration and led to be a clot when treated with the reagent. The effect of moist heat of the extract was investigated by using the sterilizer at (121)°C and pressure (15) psi at afor (5,10,15) minutes with concentration of (200)g/ml ,It was then detected using a detector (LAL) and the extract’s resistance to moist heat was determined within the specified concentration and time intervals. The effect of partially purified extract on Candida glabrata yeast was studied using microdilution method. The results showed that partially purified extract had inhibitory effect on Candida glabratayeast by (45%) . Then the heat treated extract was used to investigate it,s effect on Candida glabratayeast and at the same concentrations and durations used with the (LAL) reagent.The results showed that the boiling heat and moist heat did not affect the efficiency of inhibitory activity of purified LPS on Candida glabrata and the inhibitory ratios were comparable to the effect of non-treated partially purified lipopolysaccharide.
