ناقش قسم الكيمياء في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة ( فصل , تنقية جزئية لإنزيم الرادينيز ( (RHODمن المرضى المصابين بالسكري النوع الثاني وعلاقته بالاجهاد التأكسدي ) للطالب ( أحمد خالد مفتن ) التي انجزها تحت اشراف التدريسية في القسم ( أ.د. تغريد علوم محمد علي ) .
ونوقشت الرسالة من قبل اعضاء لجنة المناقشة :
-
أ.د. نزار احمد ناجي
-
أ.م.د. نورهان خالد شفيق
-
أ.م.د. رشا زهير جاسم
-
أ.د. تغريد علوم محمد
وبين الطالب في رسالته ان إنزيم الريدينيز يعد من الأنزيمات المسؤولة عن إزالة سمية السيانيد من خلال مسار الأزالة الطبيعية إذ يتفاعل السيانيد مع الاصرة ثنائية الكبريت الموجودة في الثايوسلفات كمصدر Sulfanc Sulfurss لتكوين الثايوسيانيت الأقل سمية الذي يطرح بالبول ونظراً لعدم وجود دراسة سابقة حول فعالية إنزيم الريدينيز في أمصال المرضى المصابين بالسكري من النوع الثاني لذا ارتأينا في دراستنا الحالية تنقية هذا الأنزيم من أمصال الدم لمرضى الداء السكري من النوع الثاني ومتابعة بعض المتغيرات الحياتية المعروفة والمرتبطة بالحالة المرضية.
ولذلك هدفت الرسالة الى:
-
قياس فعالية إنزيم الريدينيز RHD في أمصال الدم للمرضى المصابين بالداء السكري من النوع الثاني والأصحاء.
-
تنقية جزئية لأنزيم الريدينيز RHD من مصل الدم.
-
قياس تركيز كلاً من المالوندالديهايد والبيروكسي نايتريت في أمصال مرضى الداء السكري من النوع الثاني ومقارنتهم مع الأصحاء.
-
دراسة علاقة الأرتباط بين إنزيم الريدينيز RHD والمتغيرات الحيوية.
يعد داء السكري اعتلالاً يمثل الاضطرابات الأيضية التي تصيب الكاربوهيدرات بصورة رئيسة ومن أكثر امراض الغدد الصماء Endocrin glands شيوعاً، ويتصف بفرط سكر الدم نتيجة لنقص مطلق أو نسبي لهرمون الأنسولين، إذ يمثل الأخير دوراً كبيراً في تحديد اتجاه هذه الأضطرابات الأيضية وإنعكاسها على الأعراض السريرية المتزامنة للمرض، ومن الجدير بالذكر ان نقص الأنسولين يؤدي الى إختلال العمليات ألأيضية ليس فقط الكاربوهيدرات بل يشمل ايضاً إختلال العمليات ألأيضية للبروتينات، الدهون، الماء والألكتروليتات.
أٌنجزت الدراسة الحالية خلال المدة من كانون الأول 2018 لغاية شهر نيسان .2019تم أخذ (50) عينة دم من الأشخاص المصابين بالسكري النوع الثاني ولكلا الجنسين، تراوحت أعمارهم (70-30) سنة يراجعون (مركز الغدد الصم والسكري/ في محافظة بغداد). و(50) عينة من الأشخاص اللذين يبدون أصحاء بوصفهم مجموعة مقارنة، تراوحت أعمارهم (70-30) سنة.
أظهرت النتائج إنخفاضاً معنوياً (P<0.01) بصورة عامة بفعالية إنزيم الريدينيز في أمصال المرضى المصابين بداء السكري من النوع الثاني ولكلا الجنسين ( 0.714 ± 0.02) وحدة عالمية/لتر، بينما كانت معدل فعاليته (0.03 ± 2.989) وحدة عالمية/لتر في الأصحاء.
نٌقي إنزيم الريدينيز بكبريتات الأمونيوم وكانت نسبة الأشباع 65% وتم التخلص من الأملاح الزائدة بعملية الفرز الغشائي. أُكملت مراحل التنقيسة باستعمال الترشيح الهلامي بعمود Sephadex G-75 ، إذ تم الحصول على قمة واحدة كما بلغت درجة تنقية الأنزيم 274 مرة وبحصيلة انزيمية.177% ومن ثم فصلت متناظرات إنزيم الريدينيز بطريقة كروموتوغرافيا التبادل الأيوني بواسطة DEAE-Cellulose وتم الحصول على متناظر واحد لأنزيم الريدينيز هو RHDi وبدرجة نقاوة 1,402.6 وبحصيلة إنزيمية 166% بعد ذلك أجريت تنقية جزئية ثانية بوساطة كروموتوغرافيا الترشيح الهلامي باستعمال Sephadex G-75. ثم تم التأكد من نقاوة الأنزيم بعملية الترحيل الكهربائي بغياب العوامل الماسخة إذ ظهرت حزمة منفردة.
كما لوحظ أثناء الدراسة ان تراكيز كل من المالون ثنائي الألديهايد والبيروكسي نايتريت أظهرت إرتفاعاً معنوياً (P< 0.0001) مقارنة بالاصحاء.
وتم دراسة علاقة الارتباط الخطية بين إنزيم الريدينيز RHD والاجهاد التأكسدي(المالون ثنائي الألديهايد والبيروكسي نايتريت) في أمصال الدم للمرضى المصابين بالسكري من النوع الثاني والأصحاء وإيجاد معامل الارتباط. إذ تبين ان معامل الارتباط (r) بين مستوى إنزيم الريدينيز والمعايير الأخرى أظهر علاقة موجبة والذي أعتمد على مخطط الأنحدار.
وخلص الطالب في ختام رسالته الى التوصيات الاتية :
-
دراسة فعالية أنزيم الريدينيز RHD بصورة واسعة في الحالات المرضية الأخرى التي تصيب الأنسان مثل أمراض الكبد المختلفة والقولون ومرضى إرتفاع ضغط الدم فضلاً عن مرضى الداء السكري من النوع الأول.
-
دراسة إنزيم الريدينيز وعلاقته بعلم الوراثة (دراسة جينية).
-
إستخدام السوائل الحياتية (نسيج، لعاب، إدرار) بديلاً عن مصل الدم في قياس فعالية الأنزيم.
-
الدراسة الحركية لمتناظر الأنزيم RHD i وحساب الوزن الجزيئي له.
-
دراسة فعالية الأنزيم مع المتغيرات الحياتية الأخرى مثل فيتامين C ,E فضلاً عن مضادات الأكسدة الأنزيمية.
-
مقارنة فعالية الأنزيم مع الأنزيمات الأخرى للحالات المرضية وهل بالأمكان تثبيت الأنزيم كدالة تشخيصية للأمراض.
-
دراسة تأثير الأدوية والمركبات الكيميائية على فعالية الأنزيم وهل يمكن التأكد من تثبيط نشاط الأنزيم كأحد الوسائل لكبح الأمراض وتقليل خطر الأصابة بها.
Isolation, partial purification of Rhadonese (RHOD) from patients with type 2 diabetes and it is relationship to oxidative stress
By Ahmed Khalid Meftin
Prof. Dr. TaghreedUloom Mohammad
Abstract
Diabetes mellitus is a metabolic disorder that affects mainly carbohydrates and is one of the most common endocrine glands. It is characterized by hyperglycemia due to absolute or relative deficiency of the hormone insulin. Insulin deficiency disrupts metabolic processes not only carbohydrates, but also metabolic disorders of proteins, fats, water and electrolytes
The aim of this study was to assess the efficacy, purification and separation of serum analogues of RH in patients with type 2 diabetes, as well as the measurement of oxidative stress levels and free radicals (malondicaldehyde and peroxy nitrite).
The present study was completed during the period from December 2018 to April 2019. (50) blood samples were taken from people with type 2 diabetes and for both sexes, the ages of (70-30) years are reviewed (Endocrinology and Diabetes Center / Baghdad governorate). (50) samples of persons who appeared healthy as a comparison group, ranging in age (70-30) years.
The results showed a significant decrease (P <0.01) in general, the effectiveness of the enzyme rhodenase in sera of patients with type 2 diabetes and both sexes (0.714 ± 0.02) IU / L, while its effectiveness rate (0.03 ± 2.989) IU / L in healthy.
Redenase enzyme was purified with ammonium sulphate and saturation was 65% and excess salts were eliminated by membrane screening. The phasing was completed with Sephadex G-75 gel filtration. One peak was obtained and the enzyme purification rate was 274 times with an enzyme yield .177%. Redinase is RHDi with a purity of 1,402.6 and an enzyme yield of 166%. A second partial purification was then performed by gel filtration chromatography using Sephadex G-75. The purity of the enzyme was then confirmed by electrophoresis in the absence of teratogenic factors as a single beam appeared
It was also observed during the study that the concentrations of diphenyl aldehyde and peroxy nitrite showed a significant increase
(P <0.0001) compared to healthy.The linear correlation between RHD and oxidative stress (malonaldehyde and peroxy nitrite) in serum of patients with type 2 diabetes and healthy and correlation coefficient was studied. It was found that the correlation coefficient (r) between the level of the enzyme RH and other parameters showed a positive relationship, which was based on the regression scheme
