مناقشة رسالة الماجستير للطالبة ذاريات عبدالرحمن مطلك الجبوري

      الخلاصة :

    اجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص بكتريا Cronobacter sakazakii من حليب الأطفال المجفف ومن الحالاتِ السريرية لأطفالٍ دون عمر السنتين . إذ جمعت230) ) عينة، شملت (30)  عينة حليبَ أطفال لأعمـــار مختلفة دون عمــــــــــر السنتين شمـــــــــلت  Dialak1,2,3), MAMILAC1,2, Novolac AD, Novolac AR, Novolac Allernova , Similac1, Nictalia1,2, Celia1,2 , Nursoy 1 , Alpha1, Similac Gain Total Comfort , Sunny baby1, DABDUB 1, S-26AR, Primalac 1 premium ,S-26 LF, S-26 PDFgold, Primalac 1,2 , Biomil plus, Dovelac1,2 Liptomil plus1,2  , Guigoz 1) من مناطق مختلفة من بغداد، و(200) عينة سريرية، تضمنت  50  عينة من كل من  (سائل النخاع الشوكي ودم وخروج والبول)، من مستشــــــــفى مدينة الطب (حماية الأطفال ) ومستشفى الطفل المركزي, للمدة من الأول من أيلول  2015إلـــــى الأول من كانون الثاني 2016م.

      زرعت العينات على أوساطٍ زرعية خاصة، إذ زرعــــــــــت عينات الحليب  على وسط Enterobacter enrichment broth(EEB) وبعـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــدها زرعت علــــــــــــــــــــــى وسط Violet red bile glucose Agar  فأعطت المستعمرات لونَ وردي بنفسجي، وزرعـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــت العينات السريـــــــــــــــــــــــــــــــــــــرية (سائل النخاع الشوكي والدم) علــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــى وسط  Brain heart infusion broth  بعدها زرعت على وسط MacConkey agar ، أما عينات (الخروج والبول) فزرعت مباشرة على وسط MacConkey agar  ، فأعطت المستعمرات لون ورديَ،  التقطت المستعمرات النامية على وسط  VRBGAووسط MacConkey agar  وزرعت على وسط Tryptone soy agar  فأعطت  المستعمرات لون اصفر ذهبي ، ثم زرعت على وسط  Biriiltent Enterobacter sakazakii agarفأعطت المستعمرات لونَ أخضر. 

 وشخصت العزلات بالفحوصاتِ المجهرية والمزرعية و الكيموحيوية، فأعطت احتماليةَ  99%  في جهــــاز   Vitek-2 إذ أمكنَ  الحصول على  19  عزلة، وكانت جميعها تعود لبكتيريا Cronobacter sakazakii، وتضمنت 6 عزلات من عينات الحليب و بنسبة تلوث 9.09 % موزعة بواقع 3 عزلات من عينات حليــــبِ Dialak1 وعزلة  واحدة من  عينات حليب Novolac Allernova  و 2 عزلـــــة من عينات حليب Novolac AD .اما العينات السريرية فقط تم الحصول على  89 عزلة شخصت  13 عزلة على انها C.sakazakii و  بنسبة تلوث  6.5 % موزعة  بواقع 6 عزلات من عينات سائل النخاع الشوكي بنسبة  تلوث 12%، و7 عزلات من  عيناتِ الدمِ بنسبة تلوث 14% ، ولم يتم الحصول على البكتريا من عيناتِ الخروج والبول. اما 76عزلة المتبقية كانت عائدة  لبكتريا اخرى شخصت باستعمال نظام API-20E.

   بينت نتائج التحري  عن بعض عوامل الضراوةِ مظهريا بان جميعَ العزلات البكتيرية كانت قادرةً على إحداثِ حركة Swimming   بقطر يتراوح بين ( 9 – 1ملم ) و Swariming بقطر يتراوح بين  40-1)ملم) , وقدرتَها أيضًا على تكوينِ الغشاء الحيوي Biofilm  باستخدامِ 3 طرائــــــــــق، إذ بينت النتائـــج قدرةَ جميعِ العزلات علـــــــى تكويــــــــنِ الغشاء الحيوي بطريقــــــــــــــة Congo red media   إذ ان 16 عُزلة من أصل  19 عزلة  بنسبةِ  84.21%  قادرة على تكوين الغشاء الحيوي على وسط  أحمر الكونغو الصَّلب  منها 4 عزلات بكتيرية بنسبةِ 21.05% كانت منتجة  للغشاءِ الحيوي وبشكل قوي،  أي اعطت مستعمرات شديدة السواد ، و 10 عزلات بكتيرية  بنسبةِ 52.63% كانت منتجة للغشاءِ الحيويّ وبشكل متوسط، أي أعطت مستعمرات  ذاتَ سواد متوسط ،  وعزلتينِ بكتيريتينِ بنسبة 10.52% كانت منتجة للغشاءِ الحيوي بشكل ضعيف، أي أعطت مستعمرات ذات سواد قليل جدًّا ، في حين كانت 3 عزلات بكتيرية بنسبةِ  15.79% غيرَ قادرة على تكوينِ الغِشاءِ الحيوي، أي اعطت مستعمرات وردية اللون , أما بطريقة  Tubes method فقد وجد انَ 4 عزلات بكتيرية  بنسبةِ %21.05   كانت منتجة للغشاءِ الحيوي بشكل قوي،  و13 عزلة بكتيرية بنسبةِ  68.42 %  كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل متوسط ، وعزلتين بكتيرية بنسبة 10.53 %  كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف. و بطريقة Microtiter method وجد إن  9 عزلات بكتيرية بنسبةِ %47.37  كانت منتجة  للغشاءِ الحيوي بشكل قوي؛ و 8 عُزلات بكتيرية  بنسبةِ 42.11 %  كانت منتجة للغشاءِ الحيـــــــــوي بشكل متوسط؛ ، وعزلتين بكتيرية بنسبة %10.53 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف .

    وأظهرت نتائج فحصِ الحساسيةِ باستعمال جهاز Vitek-2  كونه أكثر كفاءة مقارنة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضاداً حيوياً لتحديد التركيز المثبط الادنى MICs, وبينت النتائِج ان جميعَ العزلات البكتيريةِ كانت حساسة Sensitive بنسبة 100% لعددٍ من المضَاداتِ الحيويةِ المستعملةِ في الــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــدراسة وهـــــــــــي Ampicillin –Sulbactam  و Cefotaxim و  Cefpodoxime و Ceftazidime  و Ciprofloxacim  و Gentamicin وImipenumو Levofloxacin و Meropenem و  Tazobactam–  Piperacillin وTrimethoprim – Sulfamethoxaole و Tigecyclin. بينما اختلفت العزلات البكتيرية فكانت مقاومة Resistance  أو متوسطة Intermediate , إذ كانت نسبة المقاومة اتجاه المضاد الحيوي Cefuroxim  و Cefuroxim Axetil بنسبة 5.26 % على التوالي, في حين كانت متوسطة الحساسية اتجاه المضاد الحيوي Ampicillin  بنسبة %5.26 و للمضاد   Cefuroxim بنسبة %15.79,  وللمضاد  Cefuroxim Axetilبنسبة 52.63% وللمضاد Nitrofurontion بنسبة  %15.79 .

      تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياC.sakazakii  وتضمنَت هذهِ الجيناتُ كلاً من ompA و zpx و fliD وأظهرت النتائج  وجودَ هذهِ الجيناتِ بنسبةِ 100% في جميع العزلات.

شخصت 76 عزلة المتبقية والمعزولة من العينات السريرية اذا شملت (Escherichia coli بنسبة %25 و  و Proteus vuglaris و Proteus penneri و  بنسبة 2.63% على التوالي, و Proteus mirabilis بنسبةِ 10.53% ، و  Enterobacter clocae بنسبة 11.84% ، و  Enterobacter aerogenes  بنسبة 5.26% و  Salmonella arizonae و Raoultella ornithinolytica بنسبةِ 7.89%  على التوالي ،و Klebsiella pneumonia بنسبة %15.79 و Serratia marcescen و  Serratia odoriferaو Stenotrophomonas maltophilia بنسبة 1.32% على التوالي، و Citrobacter koseri بنسبة 2.63% و Shewanella putrefaciens بنسبةِ 3.94% .