جرت المناقشة العلنية لطالبة الدكتوراه (سمية نعيمة حوار) أحدى طالبات الدكتوراه في قسم علوم الحياة / كلية التربية للعلوم الصرفة –إبن الهيثم عن أطروحتها الموسومة (فعاليه بعض المعززات البكتيريه تجاه السم الفطري باتيولين المنتج من قبل فطر Penicillium expansum المعزول من التفاح) في تخصص (علوم الحياة / علم النبات/الفطريات )
حيث تألفت لجنة المناقشة التي جرت على قاعة المرحوم الأستاذ سالم عبد الحميد من الأساتذة المدرجة أسمائهم أدناه :
1أ.د. عبد الرضا طه سرحان رئيساً كليه مدينه العلم الجامعه
2أ.د. خالد عبد الرزاق حبيب عضواً كلية العلوم للبنات/جامعة بغداد
3أ.د. انتصار محمود جمعه عضواً كلية التقنيات الصحية/هيئة التعليم التقني
4أ.د. هيفاء البير يوسف عضواً كلية التربية للعلوم الصرفة –إبن الهيثم/جامعة بغداد
5أ.م.د. رنا مجاهد عبد الله عضواً كلية التربية للعلوم الصرفة –إبن الهيثم/جامعة بغداد
6أ.د. بتول زينل علي عضواً (مشرفا) كلية التربية للعلوم الصرفة –إبن الهيثم/جامعة بغداد
7ر.باحثين د. فاضل محسن عبد عضواً (مشرفا) وزارة العلوم و التكنولوجيا
ومن الجدير بالذكر إن الطالبة هي أحد الطالبات المبتعثات اللواتي أكملن مرحلة السنة التحضيرية من دراستهم في العراق فيما إستكملت الجانب العملي لبحثها في جامعة بلايموث في المملكة المتحدة ،
وقد حصلت الطالبة على درجة الإمتياز عن مناقشتها لإطروحتها .
و فيما يلي ملخص لبحث الطالبة :
أستهدفت االدراسه الحاليه عزل الفطر أو الفطريات المسببه لتعفن التفاح وتشخيصه ودراسه قابليته على أنتاج سم الباتيولين وأستجابته لبعض أنواع المعززات البكتيريه.
أظهرت النتائج الحصول على 35 عزله من جنس البنسيليوم Penicillium من التفاح الاصفر (Golden delicious Variety)والذي تم شراؤه من الاسواق المحليه. شخص النوع بالاعتماد على العديد من الصفات المظهريه الدقيقه Micromorphology , والفسلجيه(معدلات النمو على عدد من الاوساط الزرعيه وبدرجات حراره مختلفه) فظلا عن قابليته لانتاج بعض مواد ألايض الثانويه Extrolites مثل القلويدات الاندوليه Indole alkaloids باستخدام أسهل أختبار وهو Ehrlich test وانتاجه سم الباتيولين Patulin (PAT) . شخص نوع الفطر بالاعتماد على هذه ألاسس بأنه . مثلت جميع عزلات الفطر ال(35) هذا النوع من البنسليوم . أختبرت قابليه العزلات(33) عزله على أنتاج سم الباتيولين في الوسط الزرعي السائل (وسط البطاطا –دكستروز المحور) وتم تحديد تركيز السم المنتج من قبل العزلات كميا باستخدام جهاز HPLC. أظهرت جميع العزلات قابليه لأنتاج السم بكميات أختلفت باختلاف العزلات , تراوحت الكميات المنتجه بين أدنى أنتاج 3.286 جزء بالمليون وأعلى أنتاج 12254.85 جزء بالمليون. أختيرت العزله المنتجه لأكبر كميه من السم في الدراسه الاحقه.
أظهرت نتائج معامله الفطر
P. expansum بست عزلات أو رواشحها من المعززات البكتيريه التي تمثلت بسلالتين من بكتيريا Lb. plantarum (MS23, C28 ) , Lb. acidophilus , Lb. casei , Lb. salivarius , B. breve وقياس تمو الفطر بكافه مراحل نموه الى حصول:
1- تثبيط لنمو الفطر على الوسط الصلب بطريقه Dual culture overlay assay وقياس أقطار مناطق الثبيط والتي أظهرت فعاليه تثبيط عاليه (+++) لأغلب ألانواع المختبره بقياسات هذه الطريقه.
2-تثبيط رواشح البكتريا لانبات الفطر بنسب تثبيط تراوحت بين 84.2-92.35 %. وأظهرت رواشح نوعي البكتريا
B. breve , Lb. salivarius أعلى نسبه تثبيط 92.35 و 90.02 لنوعي البكتريا على التوالي.
3-خفضت رواشح البكتريا الكثافه البصريه optical density) ( للفطر بزياده تركيز رواشح البكتريا وزياده مده التعريض وأظهر التركيز 10% لاغلب الرواشح تثبيطا عاليا أو تاما للنمو.
4-ثبطت رواشح البكتريا الوزن الجاف للفطر بنسب تراوحت بين أدنى نسبه تثبيط 21.42% للبكتريا
plantarum C28 , Lb. acidophilus .Lb وأعلى نسبه تثبيط 71.4% للبكتريا Lb. salivarius
أظهرت نتائج معامله الانواع البكتريه بتراكيز مختلفه من سم الباتيولين الى عدم تأثرها بالتراكيز المستخدمه(0.01-0.1-1 جزء بالمليون) مما يدل على مقاومه البكتريا المعززه المستخدمه لسم الباتيولين ويعطي أيجابيه لاستخدام هذه البكتريا في التجارب الاحقه.
أظهر النوعان المنتجان من البكتريا B. breve , Lb. salivarius كفاءه في أزاله أو تحطيم السم, وأعتمدت هذه الخاصيه على عدد من العوامل هي:
1-ألاعتماد على
PH : أظهرت العزلتان كفاءه طرديه لازاله سم الباتيولين بزياده قيم ال PH من 3.0 ولغايه PH .9 والتي أزيل فيها أعلى نسبه من السم90 % . كما أظهرت النتائج ظهور نوعين من المركبات M1,M2 والتي يزداد تركيزها باستمرار ازاله الباتيولين خاصه المكون M1 . هذه النتائج تقترح تحلل او تحول حيوي للباتيولين.
2-ألاعتماد على تركيز خلايا البكتريا(عدد البكتريا): أظهرالنوعان كفاءه في أزاله الباتيولين عند التركيز 1X1010 خليه مل حيث أزالت البكتريا B. breve , Lb. salivarius السم بنسبه قاربت 80 و 60 % للنوعين على التوالي في هذا التركيز. ولم تظهر التراكيز الاقل من ذلك تاثيرا في أختفاء السم. وأزهرت التجربه كذلك ظهور المركبين السابقين نتيجه تحطم أو تحويل للسم.
3-ألاعتماد على تركيز السم : أظهرت البكتريا كفاءه لازاله السم عند التراكيز القليله ببسم ابتداءا من التركيز 5 جزء بالمليون والذي أزيل فيه مايقارب 80 و 85 % من الباتيولين من قبل نوعي البكتريا على التوالي وانخفضت هذه الكفاءه بنسبه عكسيه بزياده تركيز 100 جزء بالمليون. كما ظهر المركبين السابقين كذلك باعلى تركيز عند 5 جزء بالمليون.
أظهر النوعان من البكتريا كفاءه عاليه في أزاله السم من قبل الخلايا المحطمه
sonicated 97.6 % و 93.8 % تلتها الخلايا الحيه والتي أزالت السم بنسبه 73.9 % و 85 % للنوعين على التوالي وأظهرت الخلاي المقتوله بالحراره 100°م نسبه أزاله قليله (13. 9 % و 12. 8 % ) مقارنه بالخلايا المعامله بالمؤصده والتي أظهرت أقل قابليه لأزاله السم (6.6 % و 5.3 % ) مما يعطي دليلا على أن قابليه أزاله السم هي في ألأساس تحطيمه أو تحويله الى المركبين M2, M1 واللذين قد يكونا Z-ascladiol E-ascladiol , أضافه الى عمليه الارتباط بالجدار والمكونات الاخرى للخليه والذي ظهر واضحا في الخلاي المحطمه والمقتوله حراريا بدرجه 100° م .
أظهرت النتائج الكشف عن تأثير المعززات البكتيريه بنوعيها في فطرP. expansum وأنتاجه للباتيولين وأستخدام تقنيه ال QPCR الى حصول خفض معنوي في التعبير الجيني ل idh MrNA مما يدل على تأثير كلا النوعين من البكتريا في التوفر الحيوي Bioavailability لسم الباتيولين من خلال تأثير البكتريا في أحد الجينات المسوؤله عن أنتاج الباتيولين وهو idh gene .
أظهرت نتائج تأثير كلا النوعين من المعززات البكتيريه في السميه الخلويه للباتيولين ومركباته الايضيه
M2 , M1 بأستخدام أختبار MTT وخلايا HeP-G2 الى زياده التأثير السمي بزياده تركيز الباتيولين ومركباته ألايضيه ولم يظهر المركبين ألايضيين أختلافا معنويا في السميه الخلويه مقارنه بالباتيولين النقي .
