ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة ( ابن الهيثم ) رسالة الماجستير الموسومة ( دراسة جزيئية لبكتريا الزائفة الزنجارية متعددة المقاومة للمضادات الحيوية والمعزولة من الحروق والجروح ) للطالبة ( عذراء نجم عبد الزهره غانم ) التي انجزتها تحت اشراف التدريسي في القسم ( م.د. محمود ابراهيم اسماعيل ) .
ونوقشت الرسالة على قاعة المرحوم ( أ. سالم عبد الحميد ) من قبل اعضاء لجنة المناقشة :
-
أ.د. محسن هاشم رسن (رئيسا)
-
أ.م.د. عصام جاسم خريبط (عضوا)
-
أ.م.د. محمد مهدي جواد ( عضوا)
-
م.د. محمود ابراهيم اسماعيل (عضوا و مشرفا)
وهدفت الدراسة الى :-
-
عزل وتشخيص بكتريا الزائفة الزنجارية من الجروح والحروق .
-
الكشف المظهري عن انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف وانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية.
-
اجراء فحص الحساسية.
-
الكشف عن قدرة عزلات الزائفة الزنجارية على تكوين الغشاء الحيوي وانتاج المركبات الخالبة للحديد Siderophores وامتلاكها مضخات الدفق .Efflux pumps
-
الكشف الجزيئي عن جنين السبروفلوكساسين gyrA وgyrB وجينين من الجينات المسؤولة عن تكوين الغشاء الحيوي وهما lasI وpslA.
-
اجراء التتابع التسلسلي للجينات قيد الدراسة.
شملت الدراسة الحالية جمع 163 عينة سريرية تضمنت ( 106) مسحة حروق و(57) مسحة جروح لمرضى راقدين في خمس مستشفيات بمدينة بغداد هي مستشفى الكندي التعليمي، مستشفى بغداد التعليمي، مستشفى الشهيد غازي الحريري للجراحات التخصصية، المختبرات التعليمية/ مدينة الطب و مركز الحروق التخصصي/ مدينة الطب ، وللمدة من كانون الاول 2018- آذار 2019. تم زرع مسحات كل من الحروق والجروح على وسطي آكار الماكونكي وآكار الدم لغرض عزل بكتريا الزائفة الزنجارية Pseudomonas aeruginosa. شخصت العزلات البكتيرية بالطرائق القياسية التقليدية فضلا عن اجراء بعض التجارب لبعض الخصائص المظهرية التي تتعلق بالمقاومة للمضادات الحيوية، فيما تم تأكيد تشخيص عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة لمضاد السبروفلوكساسين جينيا من خلال الكشف الجزيئي عن الجين النوعي 16SrRNA باستعمال تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR، فضلاً عن الكشف عن تضاعف قطع الدنا للجينات المسؤولة عن مضاد السبروفلوكساسين.
بينت نتائج الدراسات المظهرية، ان معدل عزل الزائفة الزنجارية من العينات السريرية كان 61.3% (100/163) من المجموع الكلي لعينات الجروح والحروق. فيما بينت نتائج اختبار الحساسية لأثنى عشر مضادا حيويا بطريقة انتشار القرص أن جميع عزلات الزائفة الزنجارية (100%) كانت متعددة المقاومة للمضادات الحيوية المختبرة . كما ظهر أن مقاومة عزلات الزائفة الزنجارية كانت عالية المقاومة لمضاداتamoxicillin (100%) و ceftazidime(81%) وticarcillin(80%) وgentamicin(84%) و amikacin(82%) وtobramycin(78%) وcefepime(57%)، بينما كانت المقاومة متوسطة لمضادات كل من meropenem(50%) وimipenem(40%) و ciprofloxacin(45%) و ofloxacin (46%)، أما مضاد الـ colistin فكان الأكثر تأثيرا في عزلات الزائفة الزنجارية المعزولة من مرضى الحروق والجروح إذ وجد أن 9% من العزلات كانت مقاومة له.
كما بينت نتائج الكشف المظهري عن انزيمات البيتالاكتاميز بطريقة القرص المزدوج التأزري أن 25%(25 عزلة) من عزلات الزائفة الزنجارية كانت منتجة لأنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف ، بينما وجد أن 50%(50عزلة) منها كانت منتجة لأنزيمات البيتالاكتاميز المعدنية بطريقة إضافة محلول EDTA إلى قرص الأمبنيم.
كما اظهرت طريقة اطباق المعايرة الدقيقة لفحص تكوين الغشاء الحيوي والامتصاص عند الطول الموجي 630 نانوميتر في عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة للسبروفلوكساسين (45عزلة) أن 48.9% من العزلات البكترية اظهرت قدرتها على تكوين الغشاء بدرجة قوية فيما اظهرت نسبة 26.7% و 24.4% من العزلات القدرة بصورة متوسطة وضعيفة على التوالي.
اما الكشف المظهري عن مضخات الدفق بطريقة العجلة الخشبية فقد أظهرت النتائج ان جميع عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة للسبروفلوكساسين (100%)، اعطت نتيجة موجبة للاختبار وفي جميع التراكيز المستعملة (5، 10، 15، 20، 25) مايكروغرام/مل. كما أظهرت جميع عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة للسبروفلوكساسين قابليتهاعلى انتاج المركبات المخلبية للحديد.
اما الدراسة الجزيئية التي تضمنت الكشف الجزيئي عن الجينين pslA وlasI والمسؤولين عن تكوين الغشاء الحيوي ، فقد اظهرت أن 86.7% و100% من عزلات الزائفة الزنجارية المقاومة للسبروفلوكساسين أحتوت الجينين على الترتيب، بينما احتوت الجين gyrA بنسبة 95.5 % والجين gyrB بنسبة 86.7%.
بينت نتائج التحليل التسلسلي DNA sequencing للجينات الاربعة gyrA, gyrB, lasI, pslA, وجود 19 طفرة وراثية من الطفرات الصامتة أوالاستبدالية في خمس عزلات من الزائفة الزنجارية تم تضعيف قطع الجينات فيها.
Molecular Study of MultidrugResistant Pseudomonas aeruginosa isolated from Burns and Wounds Samples
By Athra’a Najim AbdulZahra
Supervised by Dr. Mahmoud Ibrahim Ismail
Abstract
A total of 163 clinical samples (106 burned skins, 57 woundsspecimens) were collected from five hospitals in Baghdad city during the period December 2018 – March 2019. All clinical samples were screened for Pseudomonas aeruginosa species by culturing on MacConkey agar and Blood agar media.
The current study was founded that P. aeruginosa isolates representing 61.3% (100/163) of total burns and wounds samples, as well as founded that 45% (45/100) of P. aeruginosa isolates were resistant to ciprofloxacin (CRPA) and these isolates were focused on it in phenotypically and some genetically characteristics.
A Phenotypic antibiotic susceptibility test against 12 antibiotics by the disk diffusion method showed that all P. aeruginosa isolates were multidrug-resistant (MDR). High levels of resistance rates were recorded for several antibiotics: amoxicillin 100%, ceftazidime 81%, Ticarcillin 80%, gentamicin 84%, amikacin 82%, tobramycin 78%, cefepime 57%, and moderate levels of resistance were 50% meropenem, 40% imipenem, 45% ciprofloxacin and 46% ofloxacin, while colistin has a high effective antibiotic against MDR P. aeruginosa with resistance 9%.
Also a phenotypic detection of extended spectrum β-lactamases (ESBLs) showed that 25% (25/100) of total P. aeruginosa isolates were producer-positive, while 50% (50 isolates) of these isolates were produced metallo-betalactamases (MBLs).
In the other hands, the results of the biofilm formation test for ciprofloxacin-resistant P. aeruginosa isolates using the microtiter plate method at absorbance wavelength 630 nm revealed that 48.9% isolates were formed a strong biofilm, 26.7% formed a moderate biofilm and 24.4% of bacterial isolates formed a weak biofilm.
Phenotypic detection of efflux pumps using cartwheel method, the results appeared that all ciprofloxacin-resistant P. aeruginosa isolates were given (100%) positive results at concentrations 5, 10, 15, 20 and 25 µg/ml.
The results of the siderophores production test in the CRKP isolates showed that all isolates (100%) were produced.
In the molecular study, The results of molecular detection of pslA and lasI genes associate for biofilm formation showed that 86.7% and 100% of ciprofloxacin resistant P. aeruginosa isolates were contained the genes respectively, while gyrA and gyrB ciprofloxacin genes recorded 95.6% and 86.7% in bacterial isolates.
