قسم الكيمياء يناقش رسالة ماجستير تبحث في تنقية انزيم الفوسفاتيز الحامضي وعلاقته مع بعض المتغيرات الكيموحيوية في امصال مرضى داء السكري

ناقش قسم الكيمياء في كلية التربية للعلوم الصرفة ( ابن الهيثم ) رسالة الماجستير الموسومة (تنقية انزيم الفوسفاتيز الحامضي وعلاقته مع بعض المتغيرات الكيموحيوية في امصال المرضى (البدناء وغير البدناء) المصابين بداء السكري ) للطالبة ( ندى رزوقي طه ) التي انجزتها تحت اشراف التدريسية في القسم ( أ.م.د. نورهان خالد شفيق ) ونوقشت من قبل لجنة المناقشة التي تألفت من الاعضاء المبينة اسمائهم فيما يلي :

• أ.م.د. نوال محمد جواد الشماع ( رئيسا )

• أ.م.د. عمار لطيف حسين ( عضوا )

• أ.م.د. ايمان عبد علي عباس ( عضوا )

• أ.م.د. نورهان خالد شفيق ( عضوا ومشرفا )

         هدفت الدراسة إلى تنقية أنزيم الفوسفاتيز الحامضي من أمصال مرضى السكري (من النوع الثاني) (البدناء وغير البدناء) وعلاقتها ببعض المتغيرات البيوكيميائية ، في هذه الدراسة تم جمع (92) عينة دم في هذه الدراسة خلال الفترة من 2 نوفمبر 2019 حتى نهاية مارس 2020 في مركز الغدد الصماء والسكري / بغداد والمركز الوطني للسكري / الجامعة المستنصرية ، ستة وأربعون مريض بداء السكر من النوع الثاني، منهم (23) مريضا منهم يعانون من السمنة و(23) مريضا من غير البدناء مقارنة مع نفس المجموعات من الاصحاء ، تم أخذ جميع المعلومات للمرضى ومجموعات الاصحاء من حيث ( الوزن ، الطول ، مؤشر كتلة الجسم للبدناء (T2DM والاصحاء (25-30)) وغير البدناء T2DM والاصحاء (≤24) , العمر (32-60) ، التاريخ العائلي للأمراض المزمنة) .

        

  اشتملت الدراسة على تنقية انزيم الفوسفاتيز الحامضي من مصل (مرضى السكري من النوع الثاني من البدناء وغير البدناء) , تمت عملية التنقية بعدة خطوات شملت الترسيب ب(NH4)2SO4  بنسب تركيز تتراوح بين 30 ٪80 -٪ ، الديلزة ، التبادل الأيوني باستخدام المبادل (عمود-سيفاروز) وتم الحصول على اثنين من المتناظرات الإنزيمية لمرضى السكري من النوع الثاني الذين يعانون من السمنة ونوع واحد من المتناظرات الإنزيمية لمرضى السكري من النوع الثاني الغير بدناء في هذه الخطوة ،تم جمع الاجزاء ذات الفعالية العالية من أنزيم الفوسفاتيز الحامضي الذي تم تنقيته من الأمصال السكرية من النوع 2 الذين يعانون من السمنة وتم استخدام تقنية الترشيح الهلامي باستخدام هلام الفصل (سيفاروز-6B) كخطوة ثانية وتم الحصول على قمة ذات فعالية انزيمية واحدة فقط. كانت درجةالحرارة المثلى للانزيم المنقى (50 درجة مئوية) ودرجة الحامضية المثلى للانزيم المنقىpH=5 تم تحديد النقاوة والكتلة المولية للانزيم المنقى باستخدام الترحيل الكهربائي (SDS.PAGE) الذي يظهر حزمة منفردة واحدة ذات وزن جزيئي بحدود 56 كيلو دالتون .

          وايضا اشتملت الدراسة على قياس بعض المتغيرات البيوكيميائية ، وكانت هناك زيادة معنوية عالية في FSG ، HBA1C ، insulin , TC،TG  ، LDL-c ، VLDL-c وانزيم الفوسفاتيز الحامضي لمجموعة مرضى السكري من النوع 2 غير البدناء مقارنة بمجموعة الاصحاء ، بينما أظهرت زيادة معنوية في TG ، LDL-C ، VLDL-C ولم يكن هناك انخفاض معنوي في مقاومة الانسولين و HDL-C واليوريا والكرياتينين في مجموعة مرضى السكري من النوع 2 غير البدينين مقارنة بمجموعة الاصحاء.

        أظهرت النتائج في الدراسة الحالية انخفاضًا كبيرًا في HDL-c وارتفاعًا كبيرًا في FSG ، HBA1C ، insulin ، مقاومة الانسولين  ، Tc ، LDL-c ، VLDL-c ، انزيم الفوسفاتيز الحامضي وارتفاع كبير في TG تم العثور عليه في مجموعة مرضى السكري من النوع 2 الذين يعانون من السمنة مقارنة بمجموعة الاصحاء ، بينما لم تكن هناك زيادة معنوية في العمر ، مؤشر كتلة الجسم ، اليوريا ، الكرياتينين في مرضى السكري من النوع 2 البدناء مقارنة بمجموعة الاصحاء.

          تم الكشف عن ارتباطات موجبة عالية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي ومؤشر كتلة الجسم ، HDL-c ، VLDL-c ، اليوريا والكرياتينين ، ولكن تم العثور على ارتباطات سلبية معنوية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي و FSG ، HBA1C ، insulin ،  مقاومة الانسولين ، TC ، TG و LDL -c ، وهو أيضًا ارتباط سلبي مهم في العمر في مجموعات الاصحاء غير البدناء.

       تم الكشف عن ارتباطات موجبة عالية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي و TC و TG و LDL و VLDL-c و Creatinin ولكن تم العثور على ارتباطات سلبية ذات دلالة إحصائية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي ومؤشر كتلة الجسم ، FSG ، HBA1C ، الأنسولين ، مقاومة الانسولين و HDL-C .

        بينما كانت هناك علاقة ارتباط معنوية سالبة في العمر و HDL-c بالإضافة إلى عدم وجود ارتباط معنوي بين Acp في الدم واليوريا  في الدم في مجموعة الاصحاء على السمنة.

      أظهرت الدراسة الحالية وجود ارتباطات إيجابية ذات دلالة إحصائية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي  ومؤشر كتلة الجسم ، FSG ، HBA1C ، TG ، VLDL-C والكرياتينين ، ولكن تم العثور على ارتباطات سلبية ذات دلالة إحصائية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي والأنسولين ، مقاومة الانسولين ، Tc و LDL -c ، أيضًا ارتباط سلبي معنوي بين Acp و HDL-C في مجموعة مرضى السكري من النوع 2 غير البدينين ، كما لم يتم الكشف عن ارتباط سلبي معنوي بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي مع العمر واليوريا ، بالإضافة إلى وجود علاقة معنوية عالية في النوع غير السمنة 2 مجموعة مرضى السكر.

          تم الكشف عن ارتباطات إيجابية بين انزيم الفوسفاتيز الحامضي و FSG و HBA1C و TC و TG و LDL-C و VLDL-C ولكن ، تم الكشف عن ارتباطات سلبية ذات دلالة إحصائية بين ACP في الدم والعمر ومؤشر كتلة الجسم والأشعة تحت الحمراء و HDL-C واليوريا والكرياتينين في السمنة مجموعة السكري من النوع 2.

         تم ايجاد تغيير كبير في مستويات ACP في مصل الدم لمرضى السكري مقارنة بالاصحاء وبين غير البدناء مع السمنة T2DM لهذه الإنزيمات دور محتمل مع وجود T2DM والسمنة.

          كشفت هذه الدراسة عن مستويات غير طبيعية من الدهون بما في ذلك فرط شحوم الدم مع السمنة وارتفاع السكر في الدم غير السمنة. وأظهرت النتائج علاقة اضطراب الدهون بالسكري والسمنة.

---

Purification of acid phosphatase and its correlation with somebiochemical parameters in sera of obese, non-obese diabetic patients

By Nada .R.Taha

Supervised by Asst.prof.Dr.Norhan .K.Shafeeq

Summary

The study aimed to purifyacid phosphatase (ACP) from sera of type 2diabeticIraqi patients (obese and non-obese)and its correlation with some biochemical parameters, in this study were included ninety two samples were included in this studywere collected during the period 2nd of Nov 2019 until  end of march 2020 at Endocrine and Diabetes Center / Baghdad and National Diabetic Center /AL-MustansiriyaUniversity, forty six T2DM Iraqipatients, twenty three patients from them were obese andtwenty three were non-obese compared with same groups from control.All information was taken for patients and control groups inclusive weight, length, BMI for obese (T2DM and control (25-30)) and non-obese (T2DM and control (≤24)), age (32-60), familial history of chronic disease

           This study included purified of ACP from sera of (obese and non-obese type 2 diabetic) , purification process was done with several steps included precipitation with (NH4)2SO4 (30%-80%), dialysis, ion exchange chromatography by Di Ethyl Amino Ethanol(DEAE)sepharose anion columnwhich detected twoisoenzymes for obese type 2 diabetic and one for non-obese type 2 diabetic, highest ACP active fractions  were collected  from high  active ACP isoenzyme  that purified from obese type 2 diabetic sera was applied to sepharose 6B column and only one peak of ACPactivity was obtained. The purified enzyme had an optimum temperature (50 C˚) and optimumpH (5). Purity and molar mass was measured using (SDS.PAGE) electrophoresis showing approximately ~ 56 KD with single band

Also, the study included measurement of some biochemical parameters.There were a  high significant increase in FSG, HBA1C , insulin,TC,TG ,LDL-c ,VLDL-c and acid phosphatase fornon-obese type 2 diabetic group as compared to control, while showed a significant increase in TG,LDL-C,VLDL-Cand there were no significant decrease in HDL-C, urea  and creatinininnon-obesetype 2 diabetic group as compared to the control

         The results in the current study showeda significant decrease in HDL-cand a highly significant elevation inFSG, HBA1C, insulin, HOMA-IR,Tc,LDL-c,VLDL-c,acid phosphatase andfor  a significant elevation in TG  was found  inobese type 2 diabetic group as compared to the control, while there were no significant increase in Age, BMI, Urea,Creatinin  in obese type 2 diabetic as compared to the obese control

       A highly significant positive correlationsbetween serum acid phosphatase and BMI , HDL-c, VLDL-c, urea and creatinin was detected but ,a highly significant negative correlations was found  between serum acid phosphatase and FSG,HBA1C, insulin,HOMA -IR ,TC , TG and LDL -c ,also asignificant negative correlations in age  in non-obese controlgroups

       A highly significant positive correlationsbetween serum acid phosphatase and TC,TG,LDL-c,VLDL-c andCreatininwere detected  but ,ahighly significant negative correlations was found  between serum acid phosphatase and BMI , FSG, HBA1C, insulin, HOMA -IR  and  HDL-c

      While there were no significant negative correlations in age and HDL-c in addition to no significant between serum Acppositive correlations and urea in obese control group

       The current study showed a highly significantpositive correlations  between serum acid phosphatase and BMI ,FSG, HBA1C, TG ,VLDL-C and Creatininwere detected but, a highly significant negative correlations  were found  between serum acid phosphatase and Insulin,significant IR,Tc and LDL-c, also a significant negative correlations between Acp andHDL-C in non-obese type 2 diabetic group, also a no significant  negative correlations between acid phosphatase with age and urea were detected , In addition to a highly significant in  non-obese type 2 diabetic group.

 positive correlations between serum acid phosphatase and FSG , HBA1C, TC,TG, LDL-C and VLDL-C but ,a highly significant  negative correlations  between serum Acp and  Age ,BMI ,HOMA- IR , HDL-C ,  urea and creatinin were detected  in obese type 2 diabetic group

significant changing in serum ACP levels of diabetic patients as compared to controls  and between non-obese   with  obese T2DM were suggested a possible role of these enzyme with the presence ofT2DM and  obesity

This study revealed abnormal lipid levels including Hyperlipidemia with obesity and non-obesity hyperglycemia. The results showed the relationship of lipid disorder to diabetes and obesity

Aims of Study

Purification acid phosphatase (ACP) from sera of obese and non -obese type 2 diabetic Iraqi patients

Determination of acid phosphatase (ACP) Activity

Determination of optimum pH and temperature for purified enzyme

Estimation of purity and molar mass of enzyme by SDS-PAGE Electrophoresis

Finding the correlation of acid phosphatase with some biochemical parameters (BMI ,FSG, HBA1C, Insuline, IR, TC, TG, HDL-c, LDL-c, VLDL-c, urea, creatinine, Age  ) that can play a role in type 2 diabetic