ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة ( دور نقاط التفتيش المثبطة CTLA-4 والوسيط الخلوي IL-10 في سرطان الثدي للنساء العراقيات ) للطالب (حامد حسين علي) التي انجزها تحت اشراف التدريسيين في القسم (أ.م.د. محمد مهدي جواد و أ.م.د. حازمة موسى العباسي) ونوقشت من قبل أعضاء لجنة المناقشة المبينة أسمائهم في ما يأتي :
-
ا. د. نجوى شهاب احمد (رئيسا)
-
ا.م. زهراء حسين محمد (عضوا)
-
م.د. حنان ياسين محسن (عضوا)
-
أ.م.د. محمد مهدي جواد (عضوا ومشرفا)
-
أ.م.د. حازمة موسى العباسي (عضوا و مشرفا)
هدفت الدراسة الحالية إلى تقييم دور جزيئات نقاط التفتيش والتي تشمل كلأ من مستضد الخلايا اللمفاوية التائية السامة-4(CTLA-4) والحركي الخلوي البين ابيضاض10 (IL-10) في نشوء اورام الثدي, لذلك تضمنت الدراسة جزئين ,الاول دراسة مصليه والتي استعمل تقنية الامتزاز بالانزيم الاليزا ELISA لتحديد المستوى المصلي للحركي الخلوي البين ابيضاض-10IL- 10وCTLA-4 في المصل, بينما اجري الجزء الثاني من الدراسة الجزيئية باستعمال تقنية بطريقة تفاعل البلمرة المتسلسل- تعدد اشكال اطوال قطعالتقييدRFLP-PCR)) لتحديدالتنميط الجيني لتعدد الأشكال الوراثية لجينCTLA-4 للمنطقة + 49في الاكسون الأول للتغاير في نيوكليوتيدة واحدة (rs231775)SNP, تم استعمال تفاعل التسلسل التتابعي sequencing لمعرفة التنوع الجيني في منطقة البادئpromoter regionمن جين CTLA-4 للمنطقة 318للتغاير في نيوكليوتيدة واحدة (rs5742909 C/T)SNP .
تم جمع 90 عينه من الدم المحيطي ، شملت 45 مريضة قبل تلقي العلاج (PT) تم تشخيصه بالأصابة بسرطان الثدي في مستشفى الاورام التعليمي في مدينة الطب,وجمعت 45عينة من النساء اللاتي يبدو أنهن يتمتعن بصحة جيدة.المريضات والاصحاء يتراوح مدى أعمارهن بين 30-70 عامًا. وتم جمع العينات خلال فتره من ايلول 2019 الى شباط 2020 .
أظهرت نتائج الدراسة المصلية ان مستوى IL-10 في مصل المجموعة المصابةpg/ml 18.32 ± 56.49 ، أذ كانت النسبة مرتفعة في مصل المصابين بالمقارنة مع المستوى المنخفض الذي ظهر في مجموعة السيطرةpg/ml 5.16±21.19 ولكن الاختلاف غير معنوي عند 0.05 <P وكان مستوى CTLA-4 في مصل المصابينpg/ml)±0.823.17) مرتفعا مقارنة مع مجموعة السيطرة (pg/ml 29±2.72) كذلك الاختلاف غير معنوي عند (0.5P<).
فيما يتعلق بالدراسة الوراثية الجزيئية فقد لوحظ أن الجين CTLA-4 SNP (rs231775) له ثلاث انماط جينية (AA, AG, GG)، سجل النمط AA تكرار مرتفع في عينات السيطرة ( %95,56 ) عكس المصابين (%64.44 ) وبالمقارنة مع الانماط الاخرى فأن النمط AG له اعلى اختلاف معنوي بالاعتماد على احتمالية فيشر الدقيقة، ان مستوىCTLA-4 في مصل المصابين IDC من النمط AA كان مرتفعا مع اختلاف غير معنوي، بينما في المصابين ILC كان النمط الجيني AA موجودا ولكن باختلاف معنوي مرتفع بالمقارنة مع الانماط الجينية AG,GG في السيطرة والمصابين.
تم تحديد تسلسل نيوكليوتيدات الحامض النووي في منطقة البادئ SNP(rs5742909C/T) للجينCTLA-4 وأظهرت ثلاث انماط جينية (CC,GG,CT) بينما الانماط الجينية الاخرى (GG,GT,TT) كانت غائبة في 18 مصابة بسرطان الثدي و 10 من مجموعة السيطرة، تكرر النمط الجيني المتماثل CC في (66.67%) من المصابين وكان مرتفعا بالمقارنة مع مجموعة السيطرة ( 40.0%) ولكن الاختلاف غير معنوي عند (0.5>P) وتكرر النمط الجيني CGفي (22.22%) من المصابين وكان مرتفعا مقارنة بمجموعة السيطرة( 20.0.%) وأظهرت اختلاف غير معنوي عند (0.05>P) على احتمالية فيشر الدقيقة، بينما سجل النمط الجيني CT(11.11%) في المصابين وكان منخفضا مقارنة مع مجموعة السيطرة (40.0%) واظهرت اختلاف غير معنوي عند (0.05>P) بالاعتماد على احتمالية فيشر الدقيقة.
لذلك وفقًا للنتائج الحالية يمكننا أن نستنتج أن الأنماط الجينية AG في CTLA-4SNP (rs231775) و CC و CG في (CTLA-4 gene SNP (rs5742909 C / T كانت تمثل الجزء المسبب للمرض والنمط الجيني الشائع في الأنثى العراقية النمط الجيني AA في CTLA-4SNP(rs231775) والنمط الجيني CC في CTLA-4 SNP (rs5742909 C/ T). كانت الأليلات الأكثر شيوعًا في مجموعة الدراسة هي الأليلات A CTLA-4SNP (rs231775 والأليل C في جين CTLA-4 SNP (rs5742909 C / T) ، مما قد يؤدي إلى زيادة تعرض الأنثى العراقية للإصابة بسرطان الثدي. (تم تسجيل SNPs في قاعدة بيانات عالمية).
Role of inhibitory check point (CTLA-4) and (IL-10) in breast cancer for Iraqi women
By Hamed Hussein Ali Al-saadi
Supervised by Asst.prof.Dr.Mohammed M.Jawad and Asst.prof.Dr.Hazima M.Al-Abaasi
Summary
Breast cancer is the main reason of cancer-related deaths in developing countries and the most frequently diagnosed cancer among women worldwide. In Iraq, Breast cancer is considered the most common cancer in women compared to other type of cancer
The current study aimed to evaluate the etiological role of the inhibitory check point molecules CTLA-4 and IL-10 in the tumoregenicity of breast cancer ,so this study included two parts. The first is serological study which was carried out by using Elisa technique to determine the serum level of IL-10 and sCTLA-4 level, while the second part was conducted by using PCR-RFLP to determine the genotyping polymorphism of CTLA-4 gene for the region +49 in exon 1 SNP(rs 231775 A/G).and DNA sequencing assay to determine the genotyping polymorphism of CTLA-4 gene for the promoter region 318 SNP(rsrs5742909 C/T)
Ninety peripheral blood samples were collected (45) pre-treatment (PT) patient women diagnose with breast cancer from the Oncology Teaching Hospital of the Medical City, and the rest (45) for apparently healthy women as control group .patient and control with age range (30-70) years. During the period from September 2019 to February 2020
The results of serological study demonstrated that, the IL-10 serum level of patients group was (56.49 ± 18.32pg/ml),it was elevated in patient serum as compared to the low level in control group (21.19 ± 5.16pg/ml) but there was a non-significant dissimilarity under (p>0.05).sCTLA-4 serum level of patient was (3.17 ± 0.82 ng/ml) with an elevation level of CTLA.4 in patient serum compared to control group(2.72 ± 0.29ng/ml), also with a non-significant difference (P>0.05)
In regard to molecular genetics study,CTLA-4SNP (rs231775A/G) it has been observed that there was three genotypes (AA, AG, GG),AA genotype recorded a high frequency in control group (95.56%) versus patients (64.44%)compared to the other genotype AG, with a high significant difference according to Fisher’s exact probability. Serum level of sCTLA-4 in patient IDC with genotype AA was high with a non-significant difference, while in patients ILC, the genotype AA recorded a high significant difference as compared to control and patients with AG,GG genotypes
DNA nucleotides sequencing was identified in the promoter area of CTLA-4 gene. SNP (rs5742909 C/T) which has three genotypes (CC, CG,CT) while the other genotypes(GG,GT,TT) was absent in 18 breast cancer patients and 11 control. The homozygous genotype CC recorded was a high (66.67%) in patients versus the control (45.46%) with a non-significant dissimilarity (P>0.05).The genotype CG was (22.22%) in patients, it was high in patients versus control (18.18%) and it showed a non-significant difference under (P>0.05) according to Fisher’s exact probability. While the genotype CT which was recorded (11.11%)in patients, it was low in patients versus control (36.36%) and it showed a non-significant difference under (P>0.05) according to Fisher’s exact probability. So according to the present results we can conclude that the genotypes AG in CTLA-4SNP (rs231775A/G) and CC and CG in CTLA-4 gene SNP (rs5742909 C/T) were represented by the etiological fraction and the common genotype in Iraqi females the genotype AA in CTLA-4 SNP (rs231775A/G) and the genotype CC in CTLA-4gene SNP (rs5742909 C/T) . The most common alleles in the study group was allele A in CTLA-4 SNP (rs231775A/G) and allele C in CTLA-4 gene SNP (rs5742909 C/T) , which may lead to increase the susceptibility of Iraqi female to have breast cancer. (The SNPs were registered in global database)
Recommendations
-Determine the serum level of IL-10 in the same patients before and after mastectomy or resection surgery and then after treated with chemotherapy and explain the results.
– Study the role of IL-10 and sCTLA-4 in breast cancer patients by using real time PCR to study the levels of gene expression and compare the results.
– Further studies about other CTLA-4 gene SNPs should conduct in order to shed a light on the relationship between polymorphism and susceptibility for breast cancer
