قسم علوم الحياة يناقش رسالة ماجستير تدرس تردد بعض جينات بروتينات الأسبارتيل المفرزة من النوع ألأكثر تردداً من المبيضات المعزولة من مرضى السكري

ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) رسالة الماجستير الموسومة ( دارسة تردد بعض جينات بروتينات الأسبارتيل المفرزة من النوع ألأكثر تردداً من المبيضات المعزولة من مرضى السكري ) للطالبة ( نورس نجم عبد الله ) التي انجزتها باشراف التدريسي في القسم ( أ.م.د. ثامر عبد الشهيد محسن ) و التدريسي في جامعة النهرين ( أ.د. محسن هاشم رسن ) ونوقشت من قبل أعضاء لجنة المناقشة المبينة أسمائهم في ما يأتي :

• أ.د. أسماعيل عباس جديع (رئيسا)

• أ.م.د. محمد مهدي جواد (عضوا)

• م.د. اطياف سعيد (عضوا)

• أ.م.د. ثامر عبد الشهيد محسن (عضوا ومشرفا)

• أ.د. محسن هاشم رسن (عضوا ومشرفا)

نظرا لقله الراسات في العراق حول تردد جينات SAP في انواع مختلفه من المبيضات استهدفت الرسالة الى دراسة تردد بعض جينات بروتينات الاسبارتيل المفرزة من النوع الاكثر ترددا من المبيضات المعزولة من مرضى السكري.

تم جمع 240 عينة مقسمة الى مجموعتين الاولى 120 عينه لمرضى السكري و والثانية 120 عينة للاشخاص الذين لا يعانون من امراض مزمنة ( من المركز الوطني لعلاج وبحوث السكري  ومستشفى العلويه للولاده  وبعض المراكز الصحيه ) وكل مجموعة تضمنت 90 عينة من الفم و20 عينة من الادرار و10 عينات من المهبل ,اظهرت نتائج العزل المظهري وجود 28 ، 5 ، 2 عزلة موجبة من المبيضات المعزوله من الفم والادرار والمهبل على التوالي لمرضى السكري مقارنةً بعدد العزلات موجبة للاشخاص الاصحاء والتي كانت 10، 2 ، 6 عزلة  من الفم والادرار والمهبل على التوالي.. كما بينت النتائج إن عدد العزلات الموجبة في النساء لمرضى السكري والاصحاء كانت اكثر من الرجال  اذ كان عدد الاصابات في النساء بداء المبيضات لمرضى السكري والاصحاء 25 ، 10على التوالي ، في حين إن عدد الرجال المصابين بالمبيضات  لمرضى السكري والاصحاء كان 16، 2  على التوالي. سجلت 28 عزلة موجبة أخذت من الفم لمرضى السكري وسجلت الفئة العمرية  51-70 سنة أكثر إصابة بالمبيضات وبنسبة 57.14%  بينما كانت الفئة العمرية 20 -30 سنه اقل نسبة ظهور للمبيضات وصلت الى 14.29% ، اما الاصحاء فقد ظهرت  10 عزلات  موجبة معزولة من الفم كانت اعلاها الفئة العمرية  20-30 التي ظهرت فيها المبيضات وبنسبة 60% أما الفئتين العمريتين 31-40 و 51-70 سنه اقل نسبة ظهور للمبيضات إذ بلغت 10% لكل فئة سجلت 5 عزلات موجبة جمعت من ادرار مرضى السكري وعزلتين موجبة من الاصحاء وسجلت الفئة 51-70 سنه اعلى نسبة للمبيضات وبنسبة 80% و100% في مرضى السكري والاصحاء على التوالي. تم عزل 2 عزلة موجبة من مهبل النساء المصابات بداء السكري بواقع عزلة واحدة للفئتين العمريتين 20-30 سنة و31-40 سنة وبنسبة 50% لكل منهما ، في حين سجلت 6 عزلات من المهبل في الاصحاء  وبواقع 4 عزلات للفئة 20-30 سنه  وبنسبة 66.66% وعزلة واحدة لكل من الفئتين العمريتين 31-40 سنه و41-50 سنة وبنسبة   16.66% لكل فئة. ظهرت مستعمرات جنس المبيضات بشكل دائري او بيضوي محدب ذات لون ابيض كريمي لماعة ناعمة الملمس عند تنميتها على وسط  (SDA) Sabourand Dextrase Agar ، وبينت نتائج الفحص المجهري للمستعمرات النامية على وسط SDA  بعد صبغها باللاكتوفينول بشكل خلايا كروية او بيضوية ذات حدود خضراء مائله للازرق بسبب تجمع الصبغة على الجدار الموجب لصبغه كرام ولوحظ بعض الخلايا المتبرعمة . شخصت انواع المبيضات بإستعمال وسط chrom agar إذ ظهر نوع  C.albicans  بلون اخضر فاتح ونوع C.glabrata  كان بلون وردي شاحب اما نوع  C.tropecalis  فكان بلون ازرق في حين ان نوع C.dublineiensis  ظهر بلون اخضر داكن. أظهرت النتائج إن نوع C.albicans  له القدرة على النمو في درجة حراره 45 ْم وكذلك  تكوين الانبوب الجرثومي . أظهر النوع C,tropicalis  قابليته على النمو السطحي على وسط (SDB) Dextrose Sabouraud Broth . بينت النتائج إن النوع C.albicans  هو أكثر الأنواع إصابة لمرضى السكري في (الفم ،الادرار، المهبل ) وبنسبة 62.86% تلتها C.tropecalis  بنسبة 17.14% ثم C.glabrata  بنسبة 11.43% واخيراً C. dubineinsis بنسبة 8.57% ، كما اشار الجدول ان اكثر مناطق الجسم تعرضاً للاصابة بداء المبيضات هو الفم ثم الادرار واخيراً المهبل وبعدد 28، 5 و2 على التوالي. اما بالنسبة للأصحاء كان النوع الاكثر إصابة هو  C. dublieniensis  وبنسبة 55.56% تلتها C.albicans  بنسبة 33.33% ثم تلتها C.tropecalis بنسبة 11.11% ، إظهرت النتائج إن الفم أكثر المناطق إصابة من المهبل والادرار إذ كانت 10 عزلات تلاه المهبل ثم الادرار وبعدد 6 ، 2  على التوالي. بينت النتائج إن جميع عزلات C.albicans  لمرضى السكري قادرة على تكوين الأغشية الحيوية بينما  كونت الأغشية الحيوية ثلاثة عزلات من اصل 6 للأصحاء. كان تركيز الحمض النووي الرايبوزي منقوص الاوكسجين Deoxyribonucleic acid (DNA)  بعد قياسه في  جهازSpecteophotometer   Nanodrop على الطولين الموجيين 260 و 280 نانوميتر ذات تركيز مثالي لإكمال عملية تضاعف البلمره المتسلسل ((PCR, استعملت عينات DNA المستخلصة من انواع المبيضات للكشف عن انواع الجينات المدروسة وقد تضمنت  20 عزلة لاربعة أنواع من المبيضات 1-9 C.albicans، 10-16 C.galabrata ، 17-18 C. dublienensis  ،19-20 (C.tropicals ، ان اعلى درجة تركيز DNA كانت في نوع C.glabrata في العزلات رقم 13 و14وصلت الى  250.79 و82.08 نانوغرام على التوالي تلاه نوع C.albicans إذ سجلت العزلتين 6 و7 تركيز 33.79 و 32.52 نانوغرام على التوالي بينما كانت تركيز DNA لنوع  C.tropicalis قليلة في العزلتين 19 و20 اذ كانت 6.45 نانوغرام لكلتاهما ، سجلت العزلة 3 للنوع  C.albicans  أعلى نقاوة تلته العزلة 14 للنوع C.glabrata ثم العزلة 17 للنوع C.dubliniensis اذ كانت ( 1.86 ، 1.84 ، 1.82) نانوميتر على التوالي فيما سجلت اقل درجة نقاوة للعزلة 4 لنوع C.albicans إذ بلغت 1.58 نانومتر. كانت النتائج إيجابية لجميع العزلات المدروسة للكشف عن جينات بروتينات الاسبارتيل المفرزه   SAP1 و SAP7   إذ  كانت جميع العزلات  تحتوي على SAP1 عند578    bp (زوج قاعده ) و SAP7 عند 644bp  (زوج قاعده).

وخلصت الطالبة الى التوصيات الاتية:

1. التوسع في اجراء دراسات عن داء المبيضات لأمراض مزمنة اخرى .

2. التوسع في دراسة الانواع الاخرى لجينات SAP لانواع المبيضات المختلفةلقلة الدراسات عليها . 

3. إستعمال الطرق الجزيئية الأكثر تقدماً (RT-PCR) اي معرفه التعبير الجيني في الوقت الحقيقي هل هو فعلا أثناء الإصابة .

4. المقارنة بين معدل ارتفاع التعبير الجيني ((RT-PCR بين نوعين من الامراض المزمنة.

   ---

Study Frequency of Some Secreted Aspartyl

Proteinases  Genes From The Most Frequent Speciec of Candida Isolated From Patients with Diabetes

Mellitus

By Nawras Najm Abdullah lafta alqay i

Supervised by Assist. Prof . Dr.Thamer A.A. muhsen and Prof. Dr. mohssen H.risan

The aim of research

Due to the lack of studies in Iraq on the frequency of SAP genes in different types of candida, the thesis aimed at studying the frequency of some genes of aspartate proteins secreted from the most frequent type of candida isolated from diabetic patients

Summary

240 samples were collected divided into two groups, the first 120 samples for diabetic patients and the second 120 samples for healthy people (from the National Center for Diabetes Treatment and Research and some Baghdad hospitals) and each group included 90 samples from the mouth, 20 samples from the urine and 10 samples from the vagina, the results of phenotypic isolation showed the presence of 28, 5, 2 positive isolates of Candida spp. in the mouth, urethra and vagina, respectively, of diabetic patients, compared to the number of positive isolates 10, 2, 6 in the mouth, urine and vagina, respectively, in healthy controls.The results of phenotypic isolation showed the presence of 28, 5, and 2 positive isolates of Candida spp. in the mouth, urine and vagina, respectively, of diabetic patients, compared to the number of positive isolates of 10, 2, 6 in the mouth, urethra and vagina, respectively, in healthy controls. The results also showed that the number of positive isolates in women with diabetes and in healthy people was more than in men, as the number of infections in women with candidiasis for diabetics and healthy people was 10, 25, respectively, while the number of men infected with candidiasis for diabetics and healthy people was 16, 2 respectively.There were 28 positive isolates from the mouth for diabetic patients, and the age group 51-70 years old recorded the most infection with candidiasis, at a rate of 57.14%, while the age group 20-30 years had the lowest percentage of candidiasis and reached 14.29%, while in healthy people, 10 positive  isolated from the mouth were the highest is the age group 20-30 in which candida spp. appeared at a rate of 60%, while the two age groups 31-40 and 51-70 years old had the lowest percentage of candida spp. appearance, reaching 10% for each group.Five positive isolates were collected from the urine of diabetic patients and two positive isolates from healthy people, and the group 51-70 years old recorded the highest percentage of candida spp. at 80% and 100% in diabetic and healthy patients, respectively. 2 positive isolates were isolated from the vagina of women with diabetes, with one isolate for each category 20-30 years and 31-40 years, at a rate of 50% for each, while 6 isolates were recorded from the vagina in healthy people, and 4 isolates were recorded for the 20-30 year old group, at a rate of 66.66%,  and one isolate for each of the two age groups: 31-40 years and 41-50 years, with a rate of 16.66% for each category.Colonies of the Candida spp. appeared in a circular or convex oval shape with a creamy white color, shiny and soft to the touch when grown on SDA medium. For a cream stain, some budding cells were observed.Candida spp. were identified using chrom agar medium, C.albicans appeared in light green, C.glabrata was pale pink, C.tropecalis was blue, and C.dublineiensis appeared dark green .The results showed that C. albicans can grow at a temperature of 45° C and form a germ tube.  C, tropicalis is capable of Surface growth on SDB medium.The results showed that C. albicans was the most common type in diabetic patients in (oral, urine, and vagina) with a percentage of 62.86%, followed by C. tropecalis with 17.14%, then C. glabrata with 11.43%, and finally C. dubineinsis with 8.57%, The most isolates Candida was infected in the mouth, then urine, and finally the vagina, with a number of 28, 5 and 2, respectively. As for healthy people, the most infected species  was C. dublieniensis, at 55.56%, followed by C.albicans with a rate of 33.33%, followed by C.tropecalis with a rate of 11.11%, and the mouth recorded the most isolates infected from the vagina and urine, which were 10 isolates, followed by the vagina, then urine, with a number of 6, 2 respectively.The results showed that all C.albicans isolates of diabetic patients were able to form biofilms, while biofilms formed three out of 6 isolates of healthy people. The concentration of DNA after being measured in a Specteophotometer Nanodrop at wavelengths of 260 and 280 nm was an ideal concentration to complete the PCR process.DNA samples extracted from Candida spp.  were used to detect the types of genes studied, and they included 20 isolates of four species  of Candida 1-9 C. albicans, 10-16 C. galabrata, 17-18 C. dublienensis, 19-20 C. tropicals, with the highest degree The concentration of DNA was in C. glabrata in isolates No. 13 and 14, reaching 250.79 and 82.08 ng respectively, followed by C. albicans, where isolates No.  6 and 7 recorded a concentration of 33.79 and 32.52 ng respectively, while the concentration of DNA was for C. tropicalis was low in isolates No. 19 and 20 as it was 6.45 ngfor both.Isolate No. 3 of C. albicans recorded the highest degree of DNA purity, followed by isolate 14 of C. glabrata, and isolate 17 of C. dubliniensis, which were 1.86, 1.84, 1.82 nmrespectively, While the lowest degree of purity was recorded for isolate No. 4 of C. .albicans reaching1.58 nm. The results were positive for all studied isolates for the detection of SAP1 and SAP7 genes, as they all contained SAP1 (578bp) and SAP7 (466bp).

Recommendations

– Expanding studies on candidias is for other chronic diseases 

– Expanding the study of other types of SAP genes for different types of candida due to the lack of studies on them

– Using the most advanced molecular methods (RT-PCR), i.e. knowing the gene expression in real time whether it is actually during infection.

– Comparison of the rate of high gene expression (RT-PCR) between two types of chronic diseases