ناقش قسم علوم الحياة في كلية التربية للعلوم الصرفة (ابن الهيثم) اطروحة الدكتوراه الموسومة ( تأثير رائق بكتريا Lactobacillus plantarum في بعض جينات السموم بكتريا Staphylococcus aureus المعزولة من حالات سريرية مختلفة ) للطالبة ( رشا زياد طارق ) التي انجزتها باشراف التدريسية في القسم ( أ.د. رنا مجاهد عبدالله ) ونوقشت من قبل اعضاء لجنة المناقشة المبين اسماء اعضائها في ما يأتي :
- أ.د. لمى عبد الهادي زوين – رئيسا
- أ.د. نهاية نعمه حسين – عضوا
- أ.د. محمد مهدي جواد – عضوا
- أ.د. هند حسين عبيد – عضوا
- أ.م.د. وفاء صبري ماهود – عضوا
- أ.د. رنا مجاهد عبد الله – عضوا ومشرفا .
ويهدف البحث الى دراسة تأثير بعض المعززات الحيوية المنتجة من بكتريا Lactobacillus spp. واهمية في استعمالها كمواد مثبطة لنمو هذه البكتريا المسببة للالتهابات المعزولة من حالات سريرية مختلفة بعد التاكد من ضراوتها ومقاومتها لمختلف المضادات الحيوية .
مستخلص البحث
جمعت 220 عينة بكتيرية من مصادر سريرية مختلفة شملت: 30 عينة من التهابات المسالك البولية، 50 عينة من الجروح، 40عينة من الحروق، 30عينة من القشع و 70 عينة من عنق الرحم ومن مراكز صحية ومستشفيات عدة في مدينة بغداد وهي: المختبرات التعليمية، مستشفى بغداد التعليمي، مستشفى الشهيد غازي الحريري للجراحات التخصصية، مستشفى الحروق والجروح/ مدينة الطب وعيادات خاصة خلال المدة من 1/10/2022 ولغاية30 /1/2023. اعتمادأ على الجنس تضمنت الدراسة 115 ذكراً و105 انثى من مختلف الفئات العمرية.أما عزلات بكتريا Lactobacillus plantarum فقد تم الحصول عليها جاهزة من كلية علوم الهندسة الزراعية / جامعة بغداد والمعزولة من منتجات الالبان.شخصت العزلات بزراعتها على الاوساط الزرعية (اكار المانتول الملحي) و(اكار الدم)، تم اجراء الفحوصات المجهرية والفحوصات الكيموحيوية التي شملت فحص انزيم الأوكسيديز وفحص انزيم التخثر وفحص انزيم الكاتاليز ولغرض تاكيد التشخيص استعمل جهاز الفايتك Vitek-2 Compact System اما التشخيص الجزيئي فقد تم باستخدام جين 16SrRNA.
وتبين من خلال تشخيص هذه العينات وجود 50 عزلة تعود لبكتريا Staphylococcus aureus شملت 10 عزلات من التهابات المسالك البولية، 12 عزلة من الجروح، 8 عزلات من عنق الرحم، 15 عزلة من الحروق و 5 عزلات من القشع.اختبرت حساسية العزلات البكتيرية قيد الدراسة اتجاه 15 مضاداً حيوياً بأستخدام جهاز الفايتك Vitek-2 Compact System، وبينت النتائج أنّ جميع العزلات البكتيرية كانت مقاومة بنسبة %100 لمضاد Benzylpenicillin وكانت المقاومة لمضاد Oxacillin بنسبة 76% ولكل من المضادينCiprofloxacin ، Moxifloxacin بنسبة 42 ، 40% على التوالي ومضاد Gentamycin بنسبة 20% ومضاد Erythromycin بنسبة 78% ومضادClindamycin بنسبة 74% ومضاد Tetracycline بنسبة 40% ومضاد Fusidic Acid بنسبة 14% ومضاد Rifampicin بنسبة 6% ومضاد Trimethoprim /Sulfamethoxal بنسبة 14% وكما اظهرت العزلات أقل مقاومة لمضادات Vancomycin، Linezolid، Teicoplanin (4، 2، 2)% على التوالي وكانت جميع العزلات حساسة لمضاد Tigecycline بنسبة 100%. كما ابدت جميع عزلاتS.aureus مقاومة لمضاد الميثسيلين بنسبة 100%. تم الكشف المظهري بإستخدام فحص الحساسية لمضاد Cefoxitin ومضاد Methicillin بإستعمال طريقة Kirby-Bauer واظهرت نتائج الكشف الجزيئي بأستخدام جين mecA إنّ جميع العزلات كانت حاملة للجين وبنسبة 100%تم التحري عن ستة جينات مشفرة لسموم بكتريا S.aureus وتضمنت هذه الجينات كل من (Leucotoxin F (LukS/F-PV، Leucotoxin E (LukD/E-PV)، Toxic shock syndrome (tst)، Exfoliative toxin a (eta)،Exfoliative toxin d (etd) Exfoliative toxin (etb) واظهرت النتائج وجود الجينات الخمسة الاولى بنسبة 68%، 100%، 42%، 100%، 94% على التوالي واظهرت جميع العزلات نتيجة سالبة لجين etb.اظهرت نتيجة التحليل التتابعي لجين etaوجود طفرات صامتة لم تؤثر في نوع الحمض الاميني وطفرات اخرى أثرت في نوع الحمض الاميني السيستين إلى حمض الاميني السيرين لجين eta وبين التحليل التتابعي لكل من جينات LukS/F-PV، LukD/E -PV، tst،etd انه لاتوجد طفرات او تنوع وراثي.تم التحري عن بعض جينات الانتكرون وهو منظم لعوامل التعبير الجيني في بكتريا S.aureus وتضمنت هذه الجينات (intI1) The class-1 integron-integrase بنسبة 82% وجين ((intI2 The class-2 integron-integrase بنسبة 4% بينما اظهرت جميع العزلات نتيجة سالبة لجينات انتكرون (intI3) The class-3 integron-integrase.تم تحديد الارتباط الجيني والقرابة الوراثية بوساطة تنميط عزلات بكتريا S.aureus بأستعمال طريقة منظم الضراوة ( Accessory Gene Regulator (agrوتم توصيفه وراثيًا إلى أربعة أنواع إذ وجد (agr1) Accessory Gene Regulator-1 في 88% من العزلات بينما (Accessory Gene Regulator-2 (agr2 فوجد في %6 وAccessory Gene Regulator-3 (agr3) وجد في 72% بينما سجل النوع الرابع Accessory Gene Regulator-4 (agr4) نتيجة سلبية.
بينت نتائج الدراسة التعبير الجيني في عزلات S.aureus عند معاملتها مع رائق بكتريا L. plantarum لجين LukD/E نقصان في قيم التعبير الجيني لعزلات S.aureus (28، 38، 31 ، 50، 47، 44، 39) وزيادة في قيم التعبير الجيني في عزلات (45، 27، 46) وبينت نتائج دراسة لجينLukS/F نقصان في قيم التعبير الجيني لعزلات S.aureus (45، 38، 31، 50، 47، 39)، اما عزلات (27، 28، 44، 46) سجلت زيادة في قيم التعبير الجيني وبينت نتائج الدراسة لجينtst نقصان في قيم التعبير الجيني لعزلات S.aureus (45، 38، 50، 47، 46، 39)، بينما سجلت عزلات (44، 27، 28، 31) زيادة في قيم التعبير الجيني واظهرت نتائج التعبير الجيني لجينeta نقصان في قيم التعبير الجيني لعزلات S.aureus (31، 47، 45) اما عزلات (27، 28، 38، 44، 39، 46، 50) اعطت زيادة في قيم التعبير الجيني وبينت نتائج دراسة التعبير الجيني لجين etd نقصان في قيم التعبير الجيني لعزلات S.aureus (39، 47) في حين سجلت عزلات (45، 27، 28، 38، 31، 50، 44، 46) زيادة في قيم التعبير الجيني.
وفي ضوء النتائج المتحصلة توصلت الطالبة الى التوصيات الاتية
- إجراء دراسات عن مقاومة البكتريا للمضادات الحيوية واستعمال عدد اكبر من مضادات الحيوية ولاسيما مضادات البيتالاكتام وتحديد الجينات المقاومة المشفرة لها.
- إجراء دراسات على جينات الضراوة الأخرى لبكتريا S.aureus.
- بحث مكثف حول تحليل تسلسل الأحماض الأمينية لتحديد عدد ونوع الطفرات الجينية وتأثيرها على ترجمة البروتين وتأثيرها على عوامل الضراوة.
- إجراء دراسات وراثية متخصصة حول التنميط الجيني للبكتيريا S.aureusلفهم الارتباط الجيني وتحديد امراضيتها وتحديد العزلات الاكثر ضراوة لمنع انتشارها باستخدام طرائق التنميط الجيني الأخرى.
- دراسة التأثير التأزري بين البروبيوتك والمضادات الحيوية في التعبير الجيني لجينات عوامل الضراوة الاخرى ودراسة تأثير هذة المواد في تثبيط التعبير الجيني لبكتريا S.aureus.
- التشجيع على استعمال البربيوتك في العلاج (الرائق والمستخلص).
- دراسة التاثير المناعي لبكتريا S.aureus المعاملة برائق بكتريا Lactobacillus قي الحيوانات المختبرية (الفئران).
