مناقشة رسالة طالبة الماجستير رفل محمود عبد الجبار من قسم علوم الحياة

جرت يوم الاربعاء الموافق 19/ 12/ 2018  على  قاعة المرحوم الدكتور  سالم عبدالحميد المناقشة العلنية لرسالة طالبة الماجستير رفل محمود عبد الجبار الموسومة :

دراسة لإحدى جينات مضخة الدفق لعزلات محلية لبكتريا klebsiella pneumoniae

حيث تألفت لجنة المناقشة من التدريسيين الأفاضل :

أ.د .احسان عرفان حسين                     رئيسا

أ.م.د . سعاد خليل ابراهيم                    عضوا

أ.م.د .حارث كامل بنية                       عضوا

ا.م.د.عذراء حميد حسون                    عضوا ومشرفا

  أجريت هذه الدراسة على (60) عزلة اخذت من عينات سريرية مختلفة (البول والجروح والدم والقشع والحروق), للبكتيريا السالبة لصبغة كرام التي تكون مخمرة لسكر اللاكتوز وتمتلك صفة اللزوجة, وتم تشخيصها مبدئياً بالاعتماد على صفات المظهرية والزرعية ومن ثم الفحوصات الكيموحيوية,  وبوساطة جهاز الفايتك , ثم تم تأكيد التشخيص نهائياً باستعمال تفاعل البلمرة المتسلسل (Polymerase chain reaction) للتحري عن تتابع الحامض النووي الخاص ببكتيريا Klebsiella pneumoniae وهو جين (16-23)srDNA.

  أخضعت جميع العزلات لفحصي الحساسية للمضادات الحيوية الفحص الاول عن طريق التركيز المثبط الادنى بوساطة جهاز الفايتك والفحص الثاني بوساطة انتشار القرص ,أظهرت نتائج فحصي الحساسية , وجود انزيمات ESBL بنسبة 53.3% , وان العزلات مقاومة لمضاد Ampicillin وبنسبة 100%,  و مضاد Piperacillin/ Tazobactam وبنسبة 45% و مضاد Cefazolin بنسبة 85% و مضاد Cefoxitin بنسبة 46% و مضاد Cefotazidim بنسبة 80% و مضاد Ceftriaxone  بنسبة 81% و مضاد Cefipim بنسبة 76.6% و مضاد Ertapenem بنسبة 35% و مضاد Imipenem بنسبة 30% و مضادAmikacin بنسبة 35% ومضاد Ciprofloxacin بنسبة 26% ومضاد Levofloxacin بنسبة 18.3% ومضاد Gentamicin بنسبة 45% ومضاد Tigecycline نسبة المقاومة 5% ومضادNitrofurantoin بنسبة 93.3%و مضاد Trimethoprim/Sulfamethoxazole بنسبة .666%و مضاد Azithromycin بنسبة 58.3% و مضاد Chloramphenicol بنسبة 23.3%.

اجري اختبار العجلة الخشبية للكشف عن مضخات الدفق بالطريقة المظهرية واستعملت فيه صبغة Redsafe كمؤشر لايجابية او سلبية الاختبار بعد فحصها تحت الاشعة فوق البنفسجية, تم التحري عن وجود جين مضخة الدفق  acrA في العزلات التي تم اختيارها للدراسة ووجد ان جميع العزلات تحتوي على جين acrA كروموسوميا , تمت دراسة التعبير الجيني بطريقة q(RT-PCR) للجين acrA ومقارنته مع جين 23s للعزلتين الحساسة والمقاومة للمضادات ودرس  التعبير الجيني لكل عزلة قبل وبعد التعرض للمضادات الحيوية الاتيةImipenem, Ciprofloxacin, Amikacin, Chloramphenicol, Azithromycin .

وجدت الدراسة ان هناك زيادة في التعبير الجيني في العزلتين الحساسة والمقاومة لمضخة الدفق AcrAB عند التعرض للمضادات الحيوية Imipenem, Chloramphenicol, Azithromycin مما يدل على انها جزء من المقاومة او جزء رئيس من المقاومة, زيادة التعبير الجيني لمضخة الدفق عند التعرض للمضادين Ciprofloxacin, Amikacin  في العزلة الحساسة فقط , بينما قل التعبير الجيني لمضخة الدفق AcrAB عند التعرض للمضادين نفسهما في العزلة المقاومة مما يدل على عدم استعمال مضخة الدفق AcrAB لمقاومة هذين المضادين.

---

The MSc thesis discussion of student (Rafal Mahmood Abdul Jabar) from department of Biology

On Wednesday, the 19th of December 2018, at the hall of the late Dr.Salim Abdulhameed, The MSc thesis discussion of student (Rafal Mahmood AbdulJabar) from department of Biology entitled (Study one of efflux pump genes in local isolates of klebsiella pneumonia)has been discussed

The discussion committee

Prof.Dr.Ehsan Erfan Hussein   head

Asst.prof.Dr.Sua’ad Khalil Ibrahim   member

Asst.prof.Dr.Harith Kamil Bunia    member

Asst.prof.Dr.Adhra’a Hameed Sa’adoon   supervisor member

The Abstract

   The study is don on (60) sample of bacteria which is isolated from various clinical samples (urine, wounds, blood, sputum and burns), characterized by gram negative, lactose ferment, mucoid, identify it first of all by its shape and appearance of culture and biochemical testes then confirmed it by vitek-2 system, and the final identification don by Polymerase chain reaction which detect (16-23)sr DNA which is specific for Klebsiella pneumonia as a confirmatory diagnoses

All the isolates undergo the tow sensitivity test , the fist test don by minimum inhibitory concentration (MIC) by vitek-2 system ,and the second test was done by disk diffusion method , the result of tow sensitivity test show that: the present of ESBL by 53.3%, and all isolates is resistance to ampicillin by 100%, Piperacillin/ Tazobactam by 45%, Cefazolin by 85%,  Cefoxitin by 46%, Cefotazidim by 80%, Ceftriaxone by 81%,  Cefipim by 76.6%, Ertapenem 35%, Imipenem by 30%,  Amikacin by 35%, Ciprofloxacin by 26%,  Levofloxacin by 18.3%, Gentamicin by 45%, Tigecycline by 5%,Nitrofurantoin by 93.3%, Trimethoprim/Sulfamethoxazole by 66.6%, Azithromycin by 85.3%, Chloramphenicol by 23.3%.

Cartwheel method was done to detect the efflux pump activity by phenotype, by using red safe as an indicator for the activity of the efflux pumps, after examined and check under UV light, in the isolated that chosen for the study, we found that all of them contain AcrA gen in the chromosome by using PCR

We study the expression of efflux pump gen AcrA by q(RT-PCR) than compare it with 23s housekeeping gen for the sensitive and the resistant  isolates, before and after exposure to antibiotics (Imipenem, Ciprofloxacin, Amikacin, Chloramphenicol, Azithromycin)

We find over expression of AcrAB efflux pump when exposed to Imipenem, Chloramphenicol and Azithromycin in both isolates (the sensitive and the resistant  isolates), that mean it could be part or Maine pathway of resistant in resistant isolate,  increase expression of AcrAB efflux pump when exposed to Ciprofloxacin and Amikacin in sensitive isolate, while decrease expression of AcrAB efflux pump with the same antibiotic in resistant isolate , which is mean the AcrAB efflux pump it’s not a part of resistance in resistant isolate